目的:制備并鑒定特異性抗人N端腦鈉肽前體（NT-proBNP）抗原表位的單克隆抗體。方法:通過Bepipred在線表位預(yù)測(cè)方法和Epitope Prediction System軟件預(yù)測(cè)人NT-proBNP B細(xì)胞抗原表位,綜合2種預(yù)測(cè)結(jié)果對(duì)比優(yōu)化選取合適的2個(gè)表位肽段P1和P2,偶聯(lián)KLH為免疫原,免疫BALB/c小鼠,選擇血清效價(jià)較高的小鼠脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合;經(jīng)HAT篩選,間接ELISA法檢測(cè)和有限稀釋法進(jìn)行亞克隆,得到陽性雜交瘤細(xì)胞株;采用體內(nèi)誘生法制備腹水并用Protein G柱純化抗體;經(jīng)鑒定,對(duì)特異性最好的2株進(jìn)行純度、效價(jià)、亞型及親和力的分析。結(jié)果:通過P2-KLH免疫獲得的陽性雜交瘤細(xì)胞株1F9和P1-KLH免疫獲得的陽性雜交瘤細(xì)胞株4H2能穩(wěn)定分泌抗NT-proBNP單克隆抗體,純度較高,能與NT-proBNP重組蛋白特異性結(jié)合,效價(jià)分別達(dá)到4×104、4×105,抗體亞型均為IgG1,相對(duì)親和力常數(shù)分別為1.14×107和1.6×107L/mol。結(jié)論:獲得2株特性良好的單克隆抗體,可為下一步研制NT-proBNP檢測(cè)試劑盒提供原材料。 

【文章來源】：生物技術(shù)通訊. 2019年06期 第762-767頁

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Bepipred預(yù)測(cè)表位結(jié)果

Epitope Prediction System預(yù)測(cè)表位結(jié)果

間接ELISA法檢測(cè)P1-KLH、P2-KLH免疫的小鼠血清效價(jià)分別達(dá)12 800、6400。通過P1-KLH完全抗原免疫獲得6株可分泌NT-proBNP抗體的細(xì)胞株2D5、2C8、2E1、4B9、4D3、4H2；通過P2-KLH完全抗原免疫獲得2株陽性雜交瘤細(xì)胞株1F9、5B5。對(duì)抗體進(jìn)行鑒定，從P2和P1表位肽獲得的抗體中選擇特異性最好的1F9和4H2分別進(jìn)行特性分析。2.4 單克隆抗體特性鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
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