目的探討腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯薩奇病毒A組16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支氣管上皮細胞中對天然免疫相關信號分子的表達及T細胞免疫反應的影響。方法經RT-PCR法擴增EV71和CA16的VP1序列,插入至載體pcDNA3. 1(+),構建重組真核表達質粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分別轉染人支氣管上皮細胞16HBE,于轉染后24、48和72 h收集樣本,進行細胞內天然免疫相關信號分子表達的檢測和刺激T細胞增殖的檢測。結果經雙酶切及測序鑒定,重組真核表達質粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1構建正確。與陰性對照組比較,EV71-VP1組IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上調,而CA16-VP1組的上調幅度較小。EV71-VP1及CA16-VP1組16HBE細胞的胞內外提取物均可明顯刺激分泌IFNγ的T細胞增殖(P <0. 05)。結論 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮細胞16HBE中表達后,可差異性誘導細胞中天然免疫信號...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、質粒及細胞
    1.2 血液
    1.3 主要試劑
    1.4 重組質粒的構建
    1.5 細胞轉染
    1.6 轉染細胞中VP1基因的m RNA轉錄水平檢測
    1.7 轉染細胞中VP1蛋白水平的檢測
    1.8 轉染細胞中天然免疫反應相關信號分子表達趨勢的動力學檢測
    1.9 人T細胞流式分選
    1.1 0 轉染細胞內外產物對T細胞非特異性增殖刺激效應的檢測
    1.1 1 統計學分析
2 結果
    2.1 目的基因PCR產物的鑒定
    2.2 重組質粒的鑒定
    2.3 轉染細胞中VP1基因m RNA的轉錄水平
    2.4 轉染細胞中VP1蛋白的水平
    2.5 EV71和CA16 VP1蛋白對16HBE細胞內天然免疫相關信號分子反應的動力學作用
    2.6 轉染細胞內外產物對T細胞非特異性增殖的刺激效應
3 討論



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