【摘要】：白腐真菌具有較強降解木質纖維素的能力，靈芝屬是白腐真菌中的一大類，對其分類，降解木質纖維素高產菌株篩選方法和相關基因的系統研究，對利用靈芝降解木質纖維素和環境應用有著積極的推動作用。 該研究利用靈芝中的真菌免疫調節蛋白（FIP）基因、細胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2序列和線粒體核糖體小亞基V4-V6區（mt SSU rDNA V4-V6）序列分析了20個靈芝菌株的遺傳多樣性；在此基礎上建立了從靈芝中篩選漆酶高產菌株的方法，利用外顯子拼接法和cDNA末端快速擴增技術分別克隆了靈芝菌株漆酶（Lac）和靈芝錳過氧化酶（MnP）基因序列，并將兩個基因在畢赤酵母中進行了表達。 研究結果表明：①不同的標記基因對對靈芝區分能力不同；②靈芝00679產漆酶能力最強；克隆到的靈芝00679和靈芝50817菌株漆酶cDNA全長序列分別為1566bp和1563bp，編碼521和520個氨基酸，，均屬于多銅氧化酶家族；構建了靈芝00679漆酶基因(GlLac)表達載體pPICZαA-GlLac，并在畢赤酵母X33中進行了有效表達；③克隆到的靈芝錳過氧化物酶cDNA序列全長1337bp，編碼363個氨基酸，蛋白質包括一個木質素氧化酶的催化位點，屬于類似于植物的氧化酶超家族；構建了靈芝MnP的酵母表達載體pAO815-GlMnP，成功轉化畢赤酵母SMD1168，表達出了有活性的靈芝錳過氧化物酶。 主要結論：使用FIP基因可區分赤芝組和紫芝組，使用細胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2基因序列可區分來自不同地區的赤芝，使用mt SSU rDNA V4-V6序列能將赤芝中的不同菌株進行更好地區分。從靈芝中成功克隆到的漆酶cDNA序列編碼520個氨基酸的蛋白質，屬于多銅氧化酶家族，克隆到的靈芝錳過氧化物酶全長cDNA序列編碼363個氨基酸的蛋白質，屬于類似于植物的氧化酶超家族，這兩個基因均能在酵母中有效表達。該研究為進一步利用漆酶和錳過氧化物酶于環境修復和木質素的降解奠定了基礎。
【學位授予單位】：上海師范大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：X172

【參考文獻】

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本文編號：2605936