建立了測定嬰幼兒營養強化奶粉中5種核苷酸含量的高效液相色譜法。樣品經堿性磷酸酯酶水解,將核苷酸轉化成相應的核苷,采用硼酸凝膠吸附凈化,使用Boston pHlex ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm,5.0μm）分離,流動相A為含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac（pH為4.3）;流動相B為6.0%乙腈-離子對試劑（含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac,pH為4.3）,梯度洗脫后,二極管陣列檢測器檢測,檢測波長為260 nm,內標法定量。結果表明,5種核苷在線性范圍內相關性好,相關系數R²大于0.999;5種核苷酸的回收率在80.00%～111.23%范圍,相對標準偏差在1.8%～6.3%之間。檢出限為0.4～1.0 mg/kg,定量限為1.0～3.0 mg/kg。該方法凈化效果顯著,分離效果好,是嬰幼兒營養強化奶粉中5種核苷酸的有效檢測方法。 

【文章來源】：分析科學學報. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章頁數】：6 頁

【部分圖文】：

7種核苷混合標準溶液高效液相色譜圖

樣品溶液中7種核苷高效液相色譜圖

核苷酸帶有磷酸基團,酸性強,極性大,降低被測樣品分子的極性,在常規色譜柱上保留能力比較差,目標物和雜質不能有效分離。雖然文獻也有報道采用HILIC模式[18]進行分離,但是由于其強極性樣品很難進行有效的凈化。而核苷相對于核苷酸其分子的極性較弱,在堿性磷酸酶催化下脫去核苷酸上的磷酸基團,水解核苷酸生成核苷,降低了檢測的目標物的極性,有效增加了使各化合物在色譜柱上的保留時間,如圖3所示,腺嘌呤核苷酸在堿性磷酸酯酶作用下水解為腺嘌呤核苷,從而降低了極性。采用水解法將核苷酸水解成為核苷后,雖然降低了極性,但是乳粉基質復雜且添加了各種營養強化劑,僅采用蛋白質沉淀法達不到很好的效果,采用凝膠對復雜基質樣品中核苷進行吸附清洗后,再將目標核苷釋放出來,達到了富集和凈化目的,從而排除基質的干擾能夠準確的測定核苷的含量,從而間接準確測得核苷酸的含量。在檢測過程中采用了內標法進行定量,進一步提高了定量的準確性。

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]改進的高效液相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中5種核苷酸[J]. 勵炯,王姣斐,邱紅鈺,李瑋.  色譜. 2017(08)
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本文編號：3293208