該課題探討了3D懸滴培養與貼壁培養體外誘導人臍帶間充質干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）在成軟骨分化特性上的差異。采用機械勻漿法和組織塊貼壁培養法體外分離培養獲得第5代h UC-MSCs,流式細胞術檢測干細胞表面免疫標記物,經3D懸滴培養與貼壁培養誘導應用番紅O和阿利辛藍染色及熒光定量檢測富含透明質酸糖胺聚糖的細胞外基質形成情況以及不同時間點（3天、7天、14天）成軟骨相關基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表達,并用免疫組化染色的方法檢測II型膠原的表達情況。結果顯示,流式細胞術檢測的第5代h UC-MSCs間充質干細胞表面標記物結果符合國際細胞療法協會制定的鑒定標準; 3D懸滴培養的h UC-MSCs可形成致密的細胞聚合物,貼壁培養的細胞形態成長梭形;番紅O和阿利辛藍染色結果顯示, 3D懸滴培養和貼壁培養的h UC-MSCs均能形成軟骨細胞;但熒光實時定量PCR結果顯示, 3D懸滴培養的h UC-MSCs形成軟骨細胞的成軟骨相關基因的表達明顯多于貼壁培養細胞形成軟骨細胞的成... 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2019年10期 第1967-1975頁

【文章頁數】：9 頁

【圖文】：

第5代人臍帶間充質干細胞的表面標記表達

hUC-MSCs細胞微球的形成和形態

3D懸滴培養和貼壁培養的第5代hUC-MSCs28天成軟骨誘導后進行II型膠原免疫組化染色分析:對照組細胞質和細胞膜呈淡黃色,為弱陽性著色(圖4A和圖4D),成軟骨細胞誘導組hUC-MSCs組細胞質和細胞膜呈棕黃色,為強陽性著色(圖4B和圖4E);3D懸滴培養和貼壁培養的細胞隨機選取5個透明、非重疊樣本區域,用Image-Pro Plus分析系統對II型膠原免疫組化染色陽性結果進行統計分析,結果顯示,3D懸滴培養的誘導的第5代hUC-MSCs成軟骨能力更強(圖4C和圖4F)。兩組間比較用獨立樣本t檢驗。以P<0.05為有統計學差異。圖4 3D懸滴培養和貼壁培養hUC-MSCs誘導28天成軟骨II型膠原免疫組化染色結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長期傳代培養對人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響[J]. 張權,張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國細胞生物學學報. 2019(01)
[2]人間充質干細胞體外成軟骨分化能力綜合評價策略研究[J]. 張可華,劉靜,納濤,袁寶珠.  中國新藥雜志. 2017(18)



本文編號：2897603