目的:器官移植是臨床治療器官衰竭的唯一有效手段[1],而免疫排斥問題是器官移植面臨的主要障礙。目前器官移植術后抗排斥藥物在免疫抑制效果以及毒副作用方面不夠理想,亟需開發新型的免疫抑制劑。本實驗室前期從板藍根中提取若干單體,篩選出具有免疫抑制活性的單體成分,并通過藥效學實驗進行了驗證。在此基礎上,為了克服這些有效成分溶解性較差的問題,我們經過結構修飾得到新的化合物MSR405。本研究中,我們將通過一系列的體外實驗研究MSR405的抑制作用及其可能的作用機制方法:首先,我們通過淋巴細胞轉化實驗、無能實驗、凋亡實驗等體外實驗研究MSR405對淋巴細胞抑制增殖作用和機制。然后,采用高通量測序技術對MSR405抑制淋巴細胞增殖的作用機制進行研究。最后,在測序結果的基礎上使用qRT-PCR和WB驗證MSR405可能作用的通路,并進一步探索作用機制。結果:首先,MSR405以劑量依賴性的方式抑制淋巴細胞的增殖。其次,RNA-seq的結果表明MSR405抑制淋巴細胞增殖的能力與細胞周期有顯著相關性,并且流式細胞術結果表明,MSR405用藥組的淋巴細胞的G1期比例增加,S期比例減少,G2/M期的比例無明...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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第一章 前言
    1.1 器官移植概況
    1.2 器官移植排斥反應類型及其機制概述
        1.2.1 超急性排斥反應
        1.2.2 急性排斥反應
        1.2.3 慢性排斥反應
    1.3 淋巴細胞與器官排斥反應
        1.3.1 同種異體識別途徑
        1.3.2 T細胞的激活
    1.4 免疫抑制劑發展與應用
        1.4.1 皮質激素類免疫抑制劑
        1.4.2 抗代謝類抑制劑
        1.4.3 鈣調磷酸酶抑制劑類
        1.4.4 雷帕霉素靶蛋白抑制劑
        1.4.5 生物學免疫抑制劑
        1.4.6 中藥類免疫抑制劑
    1.5 N,N'-二環己基-N-亞麻酸酰脲(MSR405)與細胞周期信號通路
        1.5.1 N,N'-二環己基-N-亞麻酸酰脲
        1.5.2 細胞周期與細胞周期調控
        1.5.3 TGF-β/Smad信號通路
        1.5.4 PI3K-Akt信號通路
    1.6 本研究的目的、意義和內容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 研究意義
        1.6.3 研究內容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 主要耗材
    2.2 研究方法
        2.2.1 細胞免疫學實驗與方法
        2.2.2 分子生物學實驗與方法
        2.2.3 轉錄組測序(RNA-seq)
        2.2.4 統計學分析
第三章 結果與討論
    3.1 MSR405對小鼠淋巴細胞的作用
        3.1.1 MSR405對小鼠淋巴細胞增殖的影響
        3.1.2 MSR405對混合淋巴細胞培養實驗的影響
        3.1.3 MSR405對移植免疫相關基因表達的影響
        3.1.4 MSR405對淋巴細胞分泌細胞因子IL-4和IFN-γ的影響
    3.2 MSR405對小鼠淋巴細胞抑制增殖可能機制的探索
        3.2.1 MSR405對淋巴細胞的克隆無能的影響
        3.2.2 MSR405對淋巴細胞凋亡的影響
    3.3 轉錄組測序(RNA-seq)研究MSR405對淋巴細胞的作用機制
        3.3.1 差異表達分析
        3.3.2 差異基因表達富集分析
    3.4 細胞周期阻滯參與MSR405抑制淋巴細胞增殖的機制
        3.4.1 MSR405對P15、TGF-β、Cyclin E的表達的影響
        3.4.2 MSR405對淋巴細胞周期的影響
        3.4.3 MSR405對淋巴細胞周期G1/S期的影響
        3.4.4 MSR405和TGF-β抑制劑協同抑制淋巴細胞增殖
        3.4.5 MSR405對Pdk1/Akt通路的影響
    3.5 討論
第四章 結論與展望
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：4002566