三葉青又叫蛇附子，為蔓生藤本植物。三葉青是一種用途非常廣泛的中草藥。藥理研究表明具有解熱、鎮痛、抗炎、抗病毒、保肝、增強免疫、抗腫瘤等作用。

　　三葉青化學成分非常復雜，已經鑒定出的化學成分有黃酮、黃酮苷、淀粉、還原糖、甾類化合物、氨基酸等 關于三葉青的針劑提取物，目前研究發現含有淀粉、還原糖、黃酮、黃酮苷、甾體類化合物和氨基酸等 其中重要的生理活性物質有黃酮類、黃酮苷類、甾類 由于三葉青的作用非常廣泛，具有很強的藥用價值，因此，國內對三葉青有效成分的分析研究一直沒有停止 筆者對三葉青中有效成分提取方法進行研究，篩選出萃取效果較好的有機溶劑分別是乙酸乙酯、乙醚與甲醇

　　1儀器與材料

　　1．1 儀器島津SPD一20A液相色譜儀；島津LCMS一2020液質聯用質譜儀；Agilent6890N氣相色譜儀(氫氣發生器：CYH一500，進樣器：Agilent7683B，色譜柱：HP一5，30m×3201xm×0．25Ixm)；電子天平；旋轉蒸發儀。

　　1．2 試劑三葉青塊根(產自于浙江麗水，計1．25kg，粉碎后過100目篩)；乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、甲醇均為分析純。

　　2 方法與結果

　　2．1 回流提取取粉狀三葉青150g，平均分成3份，分別加入220rnL蒸餾水，浸泡3d。在6O 下恒溫回流提取3d，提取完后的藥材呈現棕褐色，漿狀 用4層紗布過濾，得濾液約200mI ，棕黃色，備用

　　2．1．1 有機萃取：收集濾液，在6O 下旋轉蒸發，減壓蒸干后得到2．46g浸膏，呈棕褐色，黏著狀 將浸膏過硅膠柱，按照極性從小到大，用有機溶劑沖洗。發現浸膏基本不溶于極性小的溶劑。最后用甲醇沖洗，部分溶于甲醇，出現紅色物質，經稱量僅為0．16g。

　　2．1．2甲醇萃取物檢測：對用甲醇萃取的收集的紅色物質進行高效液相色譜檢測，峰號5、7、8的物質含量分別是10．9396、20．0557、23．0946，占比達到54．O9％ 。

　　2．2 煎煮提取取500g三葉青，加入800g蒸餾水，浸泡3d。

　　將藥液分成2份，在IO0~C下，攪拌煎煮3d，煎煮后的藥液呈糊狀 將糊狀提取物倒入2000mL大燒杯中，加入500mL蒸餾水靜置1天1夜。之后用四層紗布過濾 兩批濾液合并．在60℃下旋轉蒸發濃縮，得到1L濃縮液，呈棕黃色．將濃縮液繼續過濾1次，析出部分大分子物質，如糖類、淀粉等。

　　2．2．1 有機溶劑梯度萃取：用于萃取濾液的有機溶劑根據極性大小為：乙醚<石油醚<二氯甲烷<乙酸乙酯<氯仿<丙酮<甲醇。按極性從小到大逐次進行萃取 用不同配比配置展開劑，展開劑為氯仿一甲醇 比例為10：1，9：1，7：1，5：l，3：1，1：1 在不同比例下，取濾液點板，放在紫外檢測器下檢測。

　　最后得到在3：1的展開劑比例下，乙酸乙酯、乙醚、丙酮、甲醇的分離效果比較好 然后將萃取物分別進行液相色譜與氣相色譜分析。

　　2．2．2 有機溶劑萃取物液相和氣相色譜檢測

　　2．2．3 甲醇萃取物液質聯用檢測：因甲醇萃取后的分離效果較好，故用液質聯用(LC／MS)檢測，其中有4個最大的峰(見圖1～5)。甲醇萃取物經過質譜檢測后，又用核磁做定量分析，計算出4個主要峰的相對分子質量為：644．70、579．50、691．70、648．65。

　　3 討論分析

　　3．1 回流提取 回流提取效果并不很好，用有機溶劑萃取時基本得不到浸膏�？赡艿脑颍孩� 三葉青中的有效成分未被有效煎煮出來；② 三葉青有效成分主要是黃酮類、甾體類與氨基酸等，是親脂性物質，難溶于極性小的溶劑；③依舊有部分溶解于水的有效成分，只是量很少，不易用水提取出來；④ 可能與其他成分形成了助溶現象，于是無法提取完全。

　　3．2 液相檢測 乙酸乙酯分析中，11號峰的含量最高，占48．3025％ ；乙醚分析中，除7、9號峰略高，其余各成分含量較多；丙酮中8號峰含量最高，占41．6450％，其余含量與乙醚相似，含量也較多；甲醇分析中除了3、7、9號含量為28．5137％ 、25．6087％ 和19．4283％ ，其余成分含量較低，萃取效果好。

　　3．3 氣相檢測 乙醚的氣相分析結果顯示，有一個含量97．07676％，可能由于乙醚提取物中其他物質不易汽化，也可能由于得到了比較純的有效成分。乙酸乙酯的分析結果沒有乙醚好，但是也有兩個組分含量較高，只是雜質含量也較多，萃取效果沒有乙醚好。

　　乙醚、甲醇中均只有一種物質含量特別高，分別為97．07676％、99．34304％；可以對乙醚及甲醇的提取物做進一步的測定和研究。丙酮中有兩種物質的成分含量比較高，分別是1號45．61510％ ，2號52．88958％ ，其他成分含量很低。

　　3．4 實驗結果嘗試了用不同萃取劑對三葉青進行提取，筆耕文化傳播，并檢測其成分含量。在萃取溶劑的選擇方面，乙酸乙酯、乙醚與甲醇的萃取效果較好。但是由于成分比較復雜，實驗室條件限制等原因，未對有效成分做進一步分離。本研究發現，水提法在沸水煎煮的狀態下提取效果比較好，用有機溶劑提取的效果也不錯，回流提取并不可取；本實驗僅用了，液相色譜分析與氣象色譜分析，簡單使用過質譜儀，對于三葉青中未知成分結構的鑒定還需要更多更有效的檢測方法和儀器。

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