目的：研究輪狀病毒腸炎患兒腸道菌群的變化并和同年齡同性別的健康兒童進行比較。從微生態的角度分析輪狀病毒腸炎的發生與腸道菌群變化的相互關系。為微生態制劑用于輪狀病毒腸炎患兒的預防和治療提供依據。并探討熒光定量PCR技術在該領域應用的實用性和可行性，以便推廣應用。 方法：收集輪狀病毒腸炎患兒及健康對照組兒童的糞便標本提取目標細菌DNA。應用細菌的16SrRNA序列設計雙歧桿菌、大腸桿菌及乳酸桿菌的引物，行常規PCR完成細菌的定性，然后取準確定量的三種細菌DNA經系列稀釋后做熒光定量PCR，制作出標準曲線，待測樣品同時進行熒光定量PCR反應并和標準曲線進行比較，獲得各樣品中三種細菌的量。 結果：輪狀病毒腸炎患兒的腸道菌群與健康兒童比較發生了明顯的變化，其腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量差異有統計學意義(P＜0.05)，而大腸桿菌的數量無顯著性變化(P＞0.05)。用本方法所得結果與其他文獻報道的用傳統的細菌培養方法所得結果相近。 結論：輪狀病毒腸炎患兒腸道中益生菌的數量較正常對照組明顯減少。在輪狀病毒腸炎的治療過程中，應避免或清除可能加重腸道菌群紊亂的因素，采用微生態制...

【文章頁數】：38 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1電泳結果

95℃15s,55℃1min,72℃45s共30個循環,最后以72℃10min延伸后結束。擴增產物通過PAGE電泳顯示各細菌的擴增片段。如圖1所示。　　左1~3道為乳酸桿菌,4~6道為雙岐桿菌,7~9道為大腸桿菌,10道為標準分子量Mark圖1　電泳結果1.2.4　....

圖2雙岐桿菌的標準曲線

標準樣品通過PCR產物進行純化獲得。將三種細菌的標準樣品按上述條件進行熒光定量PCR反應作為標準曲線,見圖2(所示為雙歧桿菌標準曲線),以不同拷貝數的陽性模板的對數為橫坐標,以PCR反應過程中出現熒光信號的初始循環數(Ct)為縱坐標繪制而成。待測樣品同時進行熒光定量PCR并和標準....

圖1電泳結果，其中左1一3道為乳酸桿菌，4一6道為雙歧桿菌，7一9道為大腸桿菌，10道為標準分子量Mark

在80V的電壓下電泳90分鐘使藍色指示帶走到膠孔中間偏下的位置，取下電泳膠，放入顯色液N(aH07.59，甲醛5.4ml，加蒸餾水至500m)l中顯色30分鐘后將電泳膠放置在凝膠成像儀中照相，即可顯示各細菌的擴增片段，圖1所示。3.4熒光定量PCR反應:同樣的方法配制混合液，反應....

圖210份標本所得雙歧桿菌的溶解曲線，顯示產物的TM值為88℃一91℃

M盯k02〕bb圖1電泳結果，其中左1一3道為乳酸桿菌，4一6道為雙歧桿菌，7一9道為大腸桿菌10道為標準分子量Mark

本文編號：4002971