目的:研究EpCAM-ING1-CART在三陰性乳腺癌及卵巢癌中的治療作用。方法:免疫組化檢測三陰性乳腺癌組織中EpCAM及EGFR抗原的表達差異,以及EpCAM在癌旁組織中的表達水平。流式細胞術檢測不同人乳腺癌細胞系之間EpCAM的表達差異以及卵巢癌細胞系SKOV3的EpCAM表達情況。針對EpCAM抗原的Exon2序列設計CAR,稱為EpCAM-ING1-CAR。慢病毒系統構建EpCAM-ING1-CAR陽性表達的T細胞,流式細胞術檢測EpCAM-ING1-CAR的表達情況。流式細胞術分析殺傷效應,ELISA實驗檢測IFN-γ的釋放量。細胞免疫熒光檢測惡性漿膜腔誘導后的SKOV3是否發生EMT變化。結果:免疫組化結果顯示EpCAM和EGFR在三陰性乳腺癌組織中均高表達,而Ep CAM表達尤為顯著。Western Blot和流式細胞術提示EpCAM在MDA-MB-468細胞及SKOV3細胞中表達水平較高。MDA-MB-231細胞部分表達EpCAM抗原。ELISA實驗證實EpCAM-ING-1-CART與MDA-MB-468及SKOV3共培養時,其IFN-γ的釋放量高于Control-T。在三陰性乳腺癌細胞治療中,流式細胞術顯示EpCAM-ING-1-CART可有效殺傷高表達EpCAM抗原的MDA-MB-468細胞,而對低表達EpCAM的MDA-MB-231細胞也具有殺傷作用。細胞免疫熒光證實惡性漿膜腔積液誘導后,SKOV3會發生EMT變化。流式細胞術分析顯示,EpCAM-ING1-CART既可殺傷SKOV3細胞,也可殺傷發生EMT變化后的SKOV3細胞。結論:EpCAM-ING1-CART對三陰性乳腺癌及卵巢癌均有治療作用。
【學位單位】：重慶醫科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9;R737.31
【部分圖文】：

MDA-MB-468 MDA-MB-231 SKOV3圖 2 EpCAM 在乳腺癌細胞株及卵巢癌細胞株中的表達量Figure 2 The expression of EpCAM in breast cancer cell lines and ovarian cancer cell lines2.3 EpCAM-ING1-CAR 的表達及 IFN-γ釋放檢測病毒感染后 48h 檢測 CAR 的表達情況。以未感染 T 細胞為對照（Control-T），則 EpCAM-ING1-CAR 的表達量為 57.74%（見圖 3A.）。將 Control-T 細胞、EpCAM-ING1-CART 細胞分別與陽性靶細胞 MDA-MB-468 及 SKOV3 按效靶比為8:1，4:1，2:1，1:1 的比例混合培養后，檢測 IFN-γ的釋放量。其檢測結果如下：以 MDA-MB-468 為靶細胞，CAR-T 組的 IFN-γ濃度分別為 3083.56±38.14pg/ml、3507.53±72.51pg/ml、3337.68±67.60pg/ml、2421.45±79.55pg/ml，而 Control-T 組 IFN-γ 濃 度 分 別 為 -28.34±6.40pg/ml 、 -45.20±2.70pg/ml 、 -42.97±4.23pg/ml 、

19A：流式細胞術檢測 EpCAM-ING1-CART 在效靶比為 1:1,2:1 及 4:1 條件下，陰陽靶細胞的存活比例；B：流式細胞術檢測 Control-T 在效靶比為 1:1,2:1 及 4:1 條件下，陰陽靶細胞的存活比例；C：無 T 細胞時的陰陽靶細胞比例；D：EpCAM-ING1-CAR-T 與 Control-T殺腫瘤效應計算。圖 4 EpCAM-ING-1-CART 可有效殺傷 MDA-MB-468 細胞Figure 4 The EpCAM-ING1-CART works in the killing of MDA-MB-468 cells2.5 流式細胞術檢測 EpCAM-ING-1-CART 對 MDA-MB-231 的殺傷效應以 MDA-MB-231 為陽性靶細胞，MCF7 為陰性靶細胞，流式分別檢測每種效

重慶醫科大學碩士研究生學位論文靶比下，CAR-T 及 Control-T 的殺傷效應。在效靶比為 2:1，4:1，8:1 時，CAR-T組的陽性靶細胞比例分別為 29.1%，7.7%，0.975%,陰性靶細胞比例分別為 25.5%，14.8% ，3.83%(如圖 5A.)；而 Control-T 組的陽性靶細胞比例分別為 67.6%，65.3%，65.6%，陰性靶細胞比例分別為 29.4%，26.9%，23.3%（如圖 5B.）；無 T 細胞對照組陽性靶細胞比例為 66.5%，陰性靶細胞比例為 32.1%（見圖 5C.）；CAR-T 組的殺傷活性分別為 45.0%，75.0%，88.0%，Control-T 組殺傷活性為-11%，-17%，-36%。CAR-T 組殺傷活性遠高于 Control-T 組（P=0.0439）（見圖 5D.）
【參考文獻】

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1 ;Breast Cancer Immunotherapy[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年04期

本文編號：2888830