目的:檢測孕激素(Progesterone,P)對不同孕激素受體(Progesterone receptor,PR)卵巢癌細胞增殖、凋亡及FOXO1表達的影響,探討孕激素在卵巢癌中作用的分子機制,為卵巢癌的治療提供相關理論依據。方法:實驗分組:對照組(孕激素濃度為0μmol/L)、實驗組(孕激素濃度分別為6.25、25、100μmol/L)。取生長良好的卵巢癌細胞HO-8910(PR高表達)和SKOV3(PR低表達)作為研究對象。1.不同濃度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分別處理兩株細胞,對照組加入等量不含孕激素的培養液,48h后倒置顯微鏡觀察細胞形態改變;2.不同濃度孕激素(6.25、25、100μmol/L)處理兩株細胞,對照組加入等量不含孕激素的培養液,分別于24h、48h、72h用CCK8法檢檢測對照組和各實驗組細胞的增殖情況;3.取生長良好的卵巢癌細胞HO-8910和SKOV3,不同濃度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分別處理兩株細胞,對照組加入等量不含孕激素的培養液,作用48h后Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術檢測對照組和各實驗組細胞凋亡情況;4.取生長良好的卵巢癌細胞HO-8910和SKOV3,不同濃度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分別處理兩株細胞,對照組加入等量不含孕激素的培養液,培養48h后提細胞蛋白,免疫印跡法(Western Blot)檢測各組PR、FOXO1蛋白的表達。結果:1.孕激素作用48h后倒置顯微鏡下細胞形態:對照組卵巢癌細胞HO-8910、SKOV3類似上皮樣細胞,為類圓形、梭形、多角形,排列緊湊,部分細胞伸出偽足;實驗組細胞間隙增大,貼壁細胞減少,漂浮細胞增多,部分細胞破碎,間質可見細胞碎片。孕激素濃度越大,以上鏡下特征越明顯,相同孕激素濃度作用相同時間,以上鏡下特征HO-8910細胞較SKOV3細胞明顯,當孕激素濃度達100μmol/L時,HO-8910的貼壁細胞變成長梭形,SKOV3細胞輪廓不清,出現多個細胞融合的現象。2.對照組和實驗組孕激素(6.25、25、100μmol/L)作用不同時間后細胞增殖抑制率(%):(1)HO-8910細胞:(24h)0.50±1.08、15.35±1.13、25.56±0.90、43.65±1.74,(48h)-0.15±1.39、24.07±0.63、43.61±3.42、64.20±1.39,(72h)-1.07±1.66、43.05±2.27、62.08±1.00、73.09±1.41;(2)SKOV3細胞:(24h)5.8±1.08、8.46±1.18、9.96±0.69、13.95±2.70,(48h)-0.15±1.39、13.46±1.04、16.15±1.19、25.84±2.04,(72h)0.43±1.24、16.87±0.66、26.87±2.38、32.24±1.14。增殖抑制率比較:孕激素可抑制HO-8910、SKOV3細胞增殖,相同濃度作用時間延長以及相同時間濃度增大,抑制作用增強,細胞增殖抑制率呈時間-效應、劑量-效應關系。(1)對HO-8910細胞,相同時間以不同濃度孕激素作用后,實驗組與對照組抑制率比較及各實驗組抑制率比較,差異有統計學意義(P0.05),相同濃度孕激素分別作用24h、48h、72h,各時間段實驗組抑制率比較,差異有統計學意義(P0.05);(2)對SKOV3細胞,相同濃度孕激素分別作用24h、48h、72h后實驗組抑制率比較,差異有統計學意義(P0.05),相同時間以不同濃度孕激素作用,作用24h后對照組與100μmol/L組抑制率比較以及作用48h、72h對照組與實驗組抑制率比較,差異均有統計學意義(P0.05),作用24h對照組與6.25、25μmol/L兩組抑制率比較,差異無統計學意義(P0.05);(3)相同的作用濃度和時間,HO-8910細胞和SKOV3細胞抑制率比較,差異有統計學意義(P0.05),孕激素對HO-8910細胞抑制增殖作用明顯強于SKOV3。3.對照組和實驗組孕激素(6.25、25、100μmol/L)作用48h后細胞凋亡率(%):(1)HO-8910細胞:凋亡率分別為1.75±0.22、5.26±0.20、16.00±0.40、42.50±3.96,隨著孕激素濃度增大,凋亡率升高,各濃度組間凋亡率比較,差異均有統計學意義(P0.05)。(2)SKOV3細胞:孕激素濃度為0、6.25、25、100μmol/L作用48h后凋亡率依次為1.44±0.55、2.75±0.66、4.11±0.47、6.96±0.41,隨著孕激素濃度增大,凋亡率升高,對照組與6.25μmol/L組、25μmol/L組與100μmol/L組凋亡率比較,差異無統計學意義(P0.05),其余各濃度組間凋亡率比較,差異有統計學意義(P0.05)。(3)相同濃度孕激素作用48h,HO-8910凋亡率較SKOV3高,兩株細胞凋亡率比較,差異有統計學意義(P0.05)。4.孕激素作用48h后HO-8910、SKOV3細胞FOXO1的表達增加,隨著孕激素濃度的增加,FOXO1表達增高,對照組與各實驗組FOXO1表達比較,差異有統計學意義(P0.05)。在HO-8910細胞中,各實驗組間FOXO1的表達比較,差異有統計學意義(P0.05),在SKOV3細胞中,6.25μmol/L組與25μmol/L組、25μmol/L組與100μmol/L組FOXO1表達比較,差異無統計學意義(P0.05)。HO-8910、SKOV3細胞中實驗組PR-B及PR-A蛋白表達與對照組比較,差異均無統計學意義。結論1.孕激素對HO-8910和SKOV3細胞的抑制增殖作用呈時間-效應、劑量-效應關系,促進凋亡作用存在劑量-效應關系,孕激素對HO-8910細胞抑制增殖和促進凋亡作用較SKOV3細胞明顯;2.孕激素可促進HO-8910和SKOV3細胞中FOXO1的表達,孕激素濃度越高,FOXO1表達越高,孕激素可能通過影響FOXO1的表達對卵巢癌細胞發揮抑制增殖、促進凋亡的作用;3.孕激素濃度不影響HO-8910、SKOV3細胞中PR-B和PR-A的蛋白表達。
【學位單位】：遵義醫學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.31
【部分圖文】：

遵義醫學院碩士學位論文 駱丹表 1 孕激素作用 24 h、48 h、72 h 后 HO-8910 細胞的增殖抑制率（ x ± s）P(μmol/L)抑制率（%）24 h 48 h 72 h0 0.50±1.08 -0.15±1.39 -1.07±1.666.25 15.35±1.13 24.07±0.63 43.05±2.27*25 25.56±0.90 43.61±3.42 62.08±1.00*100 43.65±1.74▲ 64.20±1.39▲ 73.09±1.41*▲注：*相同濃度各時間組增殖抑制率比較，P<0.05；▲相同時間各濃度組增殖抑制率比較，P<0.05

義醫學院碩士學位論文 駱表 2 孕激素作用 24 h、48 h、72 h 后 SKOV3 細胞的增殖抑制率（ x ± s）μmol/L)抑制率（%）24 h 48 h 72 h5.8±1.08 -0.15±1.39 0.43±1.2425 8.46±1.18 13.46±1.04* 16.87±0.66*▲ 9.96±0.69 16.15±1.19* 26.87±2.38*▲0 13.95±2.70* 25.84±2.04* 32.24±1.14*▲注：*相同時間與對照組增殖抑制率比較，P<0.05；▲相同濃度各時間組增殖抑制率比較，P<0.05

后凋亡率分別為 1.75±0.22、5.26±0.20、16.00±0.40、42.50±3.96，隨著孕激素濃度增大，凋亡率升高，與對照組比較，各實驗組（6.25、25、100μmol/L）細胞凋亡率升高，差異有統計學意義（P<0.05），各實驗組間凋亡率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。SKOV3 細胞凋亡率（%）：孕激素濃度為 0、6.25、25、100μmol/L 作用 48h 后凋亡率依次為 1.44±0.55、2.75±0.66、4.11±0.47、6.96±0.41，隨著孕激素濃度增大，凋亡率升高，對照組與 6.25μmol/L 組、25μmol/L 組與 100μmol/L 組凋亡率比較，差異無統計學意義（P>0.05），其余各濃度組間凋亡率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。相同濃度作用 48h，HO-8910 細胞凋亡率較 SKOV3 細胞高，兩株細胞凋亡率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。
【參考文獻】

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本文編號：2890334