銀屑病是一種常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病。其重要的病理特征是 角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增生和炎癥細(xì)胞的局部浸潤(rùn)。盡管目前從組織 病理、生化代謝、遺傳及細(xì)胞動(dòng)力學(xué)等多個(gè)方面觀察到本病存在著 某些異常變化，但對(duì)本病復(fù)雜的病理過(guò)程的產(chǎn)生還缺乏全面的解 釋。近年來(lái)，大量實(shí)驗(yàn)資料顯示來(lái)源于角質(zhì)形成細(xì)胞（Keratinocyte， KC）的神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Nerve Growth Factor，NGF）和來(lái)源于成 纖維細(xì)胞的角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Keratinocyte Growth Factor， KGF）作為KC有效的促細(xì)胞有絲分裂因子，對(duì)KC的增殖、分化、 移行及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)均起著重要的作用。迄今尚未見(jiàn)關(guān)于NGF、 KGF表達(dá)與臨床因素關(guān)系的研究及它們?cè)诓煌课槐磉_(dá)的比較及 NGF、KGF表達(dá)的平行性研究。本研究擬觀察NGF、KGF及其受 體、EGFR、PCNA在KC中的表達(dá)情況，并比較不同年齡、性別、 病程、病期、不同部位各因子之間可能存在的相互關(guān)系并探討其機(jī) 制。 實(shí)驗(yàn)方法 標(biāo)本取材 研究對(duì)象包括33例銀屑病患者，尋常型，其中男22例， 女＊例；年齡6－62歲，平均48歲；病程2周－41年，平均9年。 正常對(duì)照組為非皮膚病的外科門診小手術(shù)切取的正常皮膚13例。 活檢標(biāo)本采用常規(guī)小手術(shù)切取皮損區(qū)皮膚，及距皮損 Icm處外觀 正常皮膚8塊，取材后標(biāo)本分成兩塊，一塊立即置液氮保存并置于 ．80℃深低溫冰箱；另一塊經(jīng)10％福爾馬林包埋，送往病理科蠟塊 保存。將冰凍切片切成 5 fill切片；丙酮固定：將含有組織的蠟塊 切成約sum左右的切片，經(jīng)脫蠟、水化后運(yùn)用免疫組化SP法染色。 多克隆抗體：角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）2 角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng) 因于受體（＊＊FN；神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子州＊n。以上均為Santa Cruze 公司產(chǎn)品。單克隆抗體：神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因于受體（＊＊FR）；表皮 細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（EGFR）；增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）。以上均購(gòu) 自福建邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。 兔疫組化SP法染色 冰凍切片經(jīng)冷丙酮固定10 分鐘，PBS 液洗3次。滴加 3％HZO。緩沖液，孵育 10分鐘，然后 PBS液清洗 三次。每張切片上加 50ill的鏈親和素－過(guò)氧化物酶溶液，室溫下孵 育 30分鐘后 PBS液沖洗5分鐘X3。每張切片上加 50ill的第一抗 體，分別為鼠抗人單克隆NGF、兔抗人多克隆KGF、兔抗人多克 隆 KGFR，4’C溫度下孵育過(guò)夜后 PBS液沖洗 5分鐘 X 3。每張切 片上加50UI的生物素標(biāo)記的第二抗體，30分鐘后叩S液沖洗5分 鐘 X 3。每張切片上加 50ill 的鏈親和素－過(guò)氧化物酶溶液，顯微鏡 下觀察著色情況，約5分鐘后用自來(lái)水沖洗。在每張切片上加100UI 新鮮配置的DAB溶液，顯微鏡下觀察著色情況，約5分鐘后用自 來(lái)水沖洗。用蘇木素復(fù)染約4分鐘后自來(lái)水沖洗干猙，自然干燥后， 2 再用中性樹膠封固。石蠟切片則常規(guī)脫蠟和水化后，用PBS液沖 洗3次，每次 5分鐘，每張切片上加 3％HZOZ，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧 化物酶的活性，室溫下孵育 10分鐘，PB S液沖洗后將切片置人抗 原修復(fù)工作液中，電爐上加熱，使溫度保持在98”C－100oC，自然 冷卻20分鐘后，PBS液沖洗3次，然后各加一滴非兔疫性動(dòng)物血 清，PBS液沖洗后，再滴加 1抗，分別為鼠抗人單克隆 PCNA和 EGFR，余步驟同前。以PBS液代替1抗作為陰性對(duì)照組。 統(tǒng)計(jì)方法：統(tǒng)計(jì)處理采用SPSSS．0統(tǒng)計(jì)軟件包中的H檢驗(yàn)（Kruskal and Wallis 法）以及 Kendall 等級(jí)相關(guān)分析。 結(jié) 果 正常表皮中，KGF、KGF受體主要微弱地表達(dá)在基底層細(xì)胞的 胞漿；NGF在正常表皮未見(jiàn)或僅見(jiàn)微弱的表達(dá)，NGF受體則主要 表達(dá)在角質(zhì)層、顆粒層；EGFR表達(dá)以表皮上層為主，而PCNA在 基底細(xì)胞有零星的分布。 銀屑病表皮中，KGF、KGF受體在表皮的基底層及基底上層有 較強(qiáng)的表達(dá)，相對(duì)正常表皮明顯上調(diào)；NGF 主要表達(dá)在角化不全 的角質(zhì)層。顆粒層、棘細(xì)胞層上部，表達(dá)以胞核為主，而在基底細(xì) 胞的底膜也有微弱的表達(dá)；NGF 受體主要表達(dá)在角質(zhì)層、棘細(xì)胞 層上部，余未見(jiàn)表達(dá)；EGFR則主要表達(dá)在棘細(xì)胞上部的表皮各層， 而基底細(xì)胞及棘細(xì)胞下層未見(jiàn)表達(dá)，真皮及皮下組織內(nèi)可見(jiàn)少量 淋巴細(xì)胞。血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)：＊＊＊A則不僅表達(dá)在基底細(xì)胞，而 且在棘細(xì)胞下層可見(jiàn)較多的表達(dá)。 銀屑病患者皮損中各因于的表達(dá)與臨床因素關(guān)系分析：KGF。 NGF、EGFR、PCNA 的表達(dá)與患者的性別、年齡的大小、病程的 3 長(zhǎng)短均無(wú)關(guān)（P＞0．05）。而 KGF。NGF、EGFR的表達(dá)在進(jìn)行期、 緩解期的表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異，P分別為0．012、0、020、 0．052。 與正常對(duì)照組、非皮損組相比，皮損組KGF、KGF受體表達(dá) 均明顯上調(diào)沙均＜O．05）；而正常對(duì)照組與非皮損組則無(wú)顯著性差異 （P＞0．05）；＊＊F、＊＊FR在銀屑病皮損的表達(dá)與正常對(duì)照組、非 皮損組相比有顯著性差異（P＜0．05）Z正常對(duì)照組與非皮損組亦有 顯著性差異（P＜0刀1）。銀屑病皮損區(qū)＊＊FR比正常皮膚、非皮損 區(qū)的表達(dá)顯著上調(diào)o＜0
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R758.63
【文章目錄】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 論文
    前言
    對(duì)象和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
四、 綜述
五、 致謝

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本文編號(hào)：2889009