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一種酸性黨參多糖CPP1b的結構分析及抗腫瘤活性研究

發布時間:2016-11-13 11:13

  本文關鍵詞:黨參多糖的分析及抗腫瘤活性研究,由筆耕文化傳播整理發布。


《蘭州大學》 2013年

一種酸性黨參多糖CPP1b的結構分析及抗腫瘤活性研究

楊春霞  

【摘要】:黨參(Codonopsis pilosula)是一種常用中藥。含有多糖,皂甙,倍半萜類,多酚類,甙類,生物堿類,揮發油等多種成分。黨參多糖作為黨參中重要活性成分之一,因具有廣泛的生理活性而引起了藥學和相關工作者的廣泛關注,然而均一性的黨參多糖的研究鮮有報道。本研究系統的研究了黨參多糖提取、分離及純化工藝及其抗腫瘤和抗氧化活性。以期對黨參多糖的進一步開發利用提供理論基礎。具體研究內容如下: (1)黨參多糖的提取工藝研究:采用中心組合設計及響應曲面法,以粗多糖產率及糖含量雙指標進行優化。結果表明,兩個指標的優化條件有一定的的差異,而最終確定的提取工藝為:提取溫度91℃,提取時間120min,液料比9,提取次數4次。該工藝下粗多糖產率為為47.15%,糖含量為18.89%。 (2)黨參多糖中硒含量測定:按(1)工藝進行黨參多糖提取,黨參多糖提取液濃縮至適當提及,分取]/2體積,用80%乙醇沉淀多糖,冷凍干燥后得黨參總多糖CPP(粗糖),其余1/2提及一次用30%,50%,70%,80%的乙醇進行分級沉淀,冷凍干燥后的黨參多糖CPP1、CPP2、CPP3、CPP4。采用氫化物發生原子熒光分光度法測定了CPP1,CPP2,CPP3和CPP4中的硒含量,及不同產地黨參總糖中的有機硒含量。實驗結果證實黨參中的有機硒主要分布于黨參多糖中,分級沉淀的黨參多糖硒含量主要集中在分子量較小部分 (3)黨參多糖的抗氧化作用研究:系統研究了不同產地的黨參總糖及分級黨參多糖CPP1,CPP2,CPP3,CPP4對O2-、·OH及DPPH的清除作用。對比各產地黨參總糖對三種自由基的清除率,文黨總糖對三種自由基的清除作用均較強,其對自由基的清除能力依次為:·OH·DPPH·O2-.不同級分多糖對·OH及DPPH三種自由基的清除作用用顯強于黨參總糖。本實驗還對比研究了CPP1純化前后的抗氧化活性。結果顯示,純化后CPP1對·O2-及·OH的清除作用變強,而對DPPH的清除作用變弱,說明多糖的純化過程對其抗氧化活性影響較大 (4)黨參多糖CPP1b的分離純化、結構表征及抗腫瘤活性研究:A. CPP1b結構表征:CPP1經除蛋白、脫色素、透析、DE-52及Sephadex G200洗脫,得到三個純化的酸性黨參多糖(CPPla, CPPlb.CPP1c),重點研究了其中一個酸性多糖(CPPlb)的結構。凝膠滲透色譜—多角度激光散射儀連用技術(HPGPC—MALLS)研究結果顯示其重均分子量(Mw)及均方根半徑(Rg)分別大約為1.45×105Da,29.7nm,聚分散系數Mw/Mn為1.20,在0.9%NaCl溶液中呈無規線團結構。進一步通過甲基化分析、氣質連用、一維及二維核磁分析,確定CPP1b的分子結構為:主鏈由1→4連接的含乙酰氧基半乳糖醛酸(α-D-GalpA3Ac),1→6連接的含乙酰氧基和乙酰氨基的半乳糖(α-D-Galp3Ac4NAc),及1→2連接的鼠李糖(β-L-Rhap)組成,支鏈α-L-Arap連接于半乳糖2位。推斷CPP1b結構的重復單元為:CPP1b的掃描電鏡(SEM)圖、透射電鏡(TEM)圖、原子力顯微鏡(AFM)圖進一步驗證了CPP1b的結構。 B.CPP1b的抗腫瘤活性研究:采用噻唑藍(MTT)法研究了CPP1b在不同濃度下對人肺癌細胞A549的抑制作用,結果顯示CPP1b具有較強的抗腫瘤活性,且隨著濃度增加抑制活性增強。實驗還研究了CPP1b對甲氨蝶呤(MTX)的輔助抗腫瘤活性結果表明CPP1b對MTX的抗腫瘤活性具有明顯的協同作用。

【關鍵詞】:
【學位授予單位】:蘭州大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R284;R285
【目錄】:

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