本文關鍵詞：靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關鍵酶基因的挖掘及分析，由筆耕文化傳播整理發布。

《河南師范大學》 2014年

懷菊花脫毒快繁技術及脫毒苗大田適應性研究

周穎媛  

【摘要】：本研究以懷菊花優良品種小黃菊[Huaiqing chrysanthemum (Chrysanthemummorifolium) cv. Xiaohuangju]為試材，首次建立了懷菊花的脫毒快繁技術體系，并且對獲得的脫毒試管苗的生理生化特性、遺傳穩定性和大田適應性進行了系統研究。取得了如下研究結果： 1.建立了懷菊花的脫毒快繁技術體系 （1）適宜的脫毒培養方式是先熱處理（白天38℃，12h；夜晚30℃，12h）6周，再切取帶有一個葉原基的莖尖（0.3～0.5mm），置于MS+KT0.03mg/L培養基上培養，待長成苗后再切離莖尖，培養成苗。成苗率達54%，脫毒率達80%。 （2）脫毒苗快速繁殖適宜的培養基是MS+NAA0.05mg/L+6-BA0.01mg/L，壯苗生根的培養基是1/2MS+PP3330.2mg/L，其壯苗生根效果最好，移栽時苗根系發達，葉色濃綠，莖桿粗壯，移栽成活率達95%。 2.探明了脫毒對懷菊花試管苗生理生化和遺傳穩定性的影響 （1）脫毒提高了懷菊花的光合能力以及N代謝水平。與對照苗相比，在生長發育過程中，脫毒試管苗葉片中葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素含量顯著增加，，NR活力、Pro含量和可溶性蛋白含量均顯著提高。 （2）脫毒降低了懷菊花的膜脂過氧化程度，提高了抗膜脂過氧化能力。與對照苗相比，培養期間，脫毒試管苗葉片中MDA含量、O2·-生成速率和H2O2含量均低于對照苗，酶促清除系統的5中保護酶（SOD、POD、CAT、APX、GR）活力增加，非酶促的2種保護物質（ASA、GSH）含量增加，均達到顯著性差異（P=0.05）。 （3）同工酶水平和分子水平的證據顯示脫毒處理沒有改變懷菊花的遺傳穩定性。經POD、SOD同工酶比較，脫毒苗與對照苗的條帶數并沒有發生變化，而亮度高于對照苗，說明脫毒后POD、SOD的穩定性沒有改變，活性卻增加了；在DNA水平上，用篩選出的引物ISSR05對脫毒苗和對照苗進行ISSR檢測，二者擴增出的9條條帶均沒有差異。 3.脫毒增強了懷菊花的大田適應性，提高了產量、改善了品質，篩選出了脫毒優良株系。 （1）脫毒增強了懷菊花的大田長勢。不同脫毒株系的株高、冠幅均高于對照，以脫毒株系YD5J6最為突出，與其對照株系YD5相比，在P=0.05水平上，株高在8、9、10月達顯著性差異，冠幅在每個月都有顯著性差異。 （2）脫毒沒有改變懷菊花的花期，但提高了其產量。與對照株系相比，脫毒株系單株鮮重、單株干重、單株花頭數、單株分蘗數、舌狀花花瓣的長度和寬度均有所增加，其中脫毒株系YD5J6的單株花頭數、單株干重、單株鮮重、畝產與其對照株系YD5相比均達到顯著性差異（P=0.05），畝產（鮮重）可達1170.12kg，增幅為16.4%。 （3）脫毒提高了與綠原酸和木樨草苷合成相關的關鍵酶的活力，改善了品質。各脫毒株系花瓣的PAL、C4H、4CL活力在四個花期（現蕾期、透色期、初花期、盛花期）均高于對照株系，透色期達到最高，其中脫毒株系YD5J6與其對照株系YD5在各個花期均達顯著性差異（P=0.05）；各脫毒株系花瓣中綠原酸、木犀草苷含量均高于對照，且脫毒株系YD5J6與其對照株系YD5有顯著性差異（P=0.05），綠原酸含量高達0.79%，木犀草苷含量高達0.22%，增幅分別為39.7%、62.6%。 綜合以上，本研究不僅建立了有效的懷菊花脫毒快繁技術體系，而且篩選出了表現優良的脫毒株系，為懷菊花脫毒苗的推廣與應用提供了理論依據。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：S682.11
【目錄】：

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