肌抑素是肌肉增生的負調控因子,為改良家畜產肉性狀的重要候選基因。本研究設計了Cas9/sgRNA表達載體與供體DNA,通過電轉染方法將其導入豬PK15細胞,經G418抗性篩選和熒光蛋白標記甄別,篩選到帶陽性標記的細胞克隆。通過跨界PCR、長距離PCR、Western印跡、Southern印跡及PCR產物測序,證明了豬肌抑素的第3外顯子序列特異性同源重組事件的發生。在豬肌抑素的第3外顯子區域找到了1個有效的CRISPR/Cas9打靶位點,帶陽性標記的細胞克隆經過多次篩選分離,獲得了肌抑素單等位基因失活的穩定細胞系,為深入研究肌抑素的功能提供了重要的實驗材料。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 Cas9/sgRNA表達載體的靶位點設計和載體的構建
    1.3 細胞轉染和陽性克隆細胞篩選
    1.4 跨界PCR和長距離PCR引物設計
    1.5 Southern印跡
    1.6 Western印跡
2 結果
    2.1 合成載體測序及酶切驗證
    2.2 中靶細胞分離
    2.3 PCR及產物測序
    2.4 Southern印跡和Western印跡
3 討論



本文編號：4004179