目的利用原核系統對人乳頭瘤病毒（HPV）16型L1蛋白優勢抗原表位進行重組表達與純化,并檢測血清學反應。方法對HPV16型L1蛋白優勢抗原表位進行全基因合成,將核酸片段克隆至pET-DsbC原核表達載體,重組質粒轉化大腸埃希菌Rosetta（DE3）,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達,采用親和層析對表達產物進行純化,采用免疫印跡法、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）驗證重組蛋白的免疫學活性。結果成功構建了pET-DsbC-HPV16 L1表達載體,并在大腸埃希菌Rosetta（DE3）中實現了穩定的可溶性表達。重組DsbC-HPV16 L1蛋白經親和層析進行純化,相對分子質量為45 000,純度為95%,重組蛋白純化得率為22%。免疫印跡法結果顯示,重組DsbC-HPV16 L1蛋白可與HPV16型陽性血清產生特異的抗原-抗體反應,與重組DsbC蛋白或健康人血清無交叉反應,具有良好的特異性。ELISA結果顯示,重組DsbC-HPV16 L1蛋白與HPV16型陽性血清有較強的免疫反應性,A450 nm均值為0.56,高于健康人血清和磷酸鹽緩沖液（PBS）陰性對照（A450n... 

【文章來源】：檢驗醫學. 2020年09期 第928-932頁

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HPV16 L1 C端核酸PCR鑒定凝膠電泳結果

Dsb C-HPV16 L1融合表達載體經轉化大腸埃希菌Rosetta(DE3）宿主菌后以IPTG誘導，可獲得目的蛋白的原核表達，冰浴超聲破碎后進行SDS-PAGE。結果顯示，在目的相對分子質量46 000處（Dsb C蛋白為28 000）有明顯的蛋白表達，目的蛋白占菌體蛋白的30%以上。超聲破碎后的上清液中可溶目的蛋白占表達蛋白的50%以上。見圖2。超聲破碎后的上清液以親和層析純化，150 mmol/L咪唑洗脫獲得的純化融合蛋白經SDS-PAGE分析，純度為95%，見圖3。采用BCA蛋白定量法（重組蛋白純化得率=純化后的目的蛋白/上樣前上清液總蛋白×50%）計算得重組蛋白純化得率為22%。

超聲破碎后的上清液以親和層析純化，150 mmol/L咪唑洗脫獲得的純化融合蛋白經SDS-PAGE分析，純度為95%，見圖3。采用BCA蛋白定量法（重組蛋白純化得率=純化后的目的蛋白/上樣前上清液總蛋白×50%）計算得重組蛋白純化得率為22%。2.3 重組融合蛋白抗原性的免疫印跡法結果

【參考文獻】：
期刊論文
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