草魚(Ctenopharyngodon idella)是我國水產養(yǎng)殖的主要養(yǎng)殖魚類之一。2011年產量達到420萬噸(FAO,2012)。隨著草魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,各種病癥的頻發(fā),特別是與脂代謝相關的疾病(脂肪肝綜合癥),嚴重制約其產業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。本論文以具有重要經濟價值的草魚為研究對象,以與脂代謝關鍵酶(葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)和肉堿棕櫚酰轉移酶I(CPT I))為研究重點,借助蛋白水平(酶學動力學特性)和分子水平(克隆、結構分析和組織表達)的手段,擬對草魚不同組織和不同發(fā)育期的關鍵酶進行研究,同時從脂代謝相關酶的酶活性及其基因表達水平研討了礦物元素銅和鋅與脂代謝的關系。1草魚G6PD的分離純化及其動力學性質的研究本研究從草魚肝胰臟中通過2’,5’-ADP-瓊脂糖4B親和層析和DEAE瓊脂糖離子交換層析分離純化G6PD,并研究了該酶學的分子量、最適溫度、最適p H和堿性條件下的穩(wěn)定性、動力學參數(shù)以及金屬離子對酶活性的影響。實驗發(fā)現(xiàn),純化后G6PD最終酶活性為18U/mg蛋白,純化倍數(shù)為1066,最終純化回收率為19.5%,亞分子量為71.85k Da。G6PD的最適溫度為42...

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1G6PD在細胞代謝中的作用Fig.1.1RoleofG6PDincellularmetabolism(Salati和Amir-Ahmady2001)

戊糖磷酸途徑（Pentosephosphatepathway,PPP）又稱戊糖支路（pentoseshun酸葡萄糖酸途徑（phosphogluconatepathway）及戊糖磷酸循環(huán)（pentosephosphycle），是動物體內糖代謝過程中的重要途徑，其主要生理....

圖1.2可逆抑制作用動力學曲線（A：競爭性抑制曲線；B：非競爭性抑制曲線；C：反競爭性抑制曲線）（王鏡巖等，2002）

草魚脂代謝相關酶的分離純化、分子克隆、酶動力學性質及對銅和鋅的響應研究015）應用毛細管微反應酶的酶活測定方法研究G6PD，結果表明Cu2+，Pb2+，+競爭性抑制G6PD，而KMnO4為反競爭性抑制。同時，deSchroeder（2005）分Zn2+對來源于蟾蜍卵巢....

圖1.3魚體肝臟組織中能量代謝主要途徑

示了高脂飼料能抑制脂肪的生成，同時，表明高脂對肝存在組織特異性。Regost等（2001）研究表明投喂高脂生成酶活性沒有顯著性差異，可能與魚的種類有關。在胞實驗下，發(fā)現(xiàn)EPA和DHA均抑制了脂肪的沉積（Alvar03），對黑鯛的研究中也得到了類似的結果（Om等，20。飼....

圖2.1(A)：G6PD的SDS-PAGE電泳圖（泳道1：組織勻漿液；2：SDS-PAGE標準蛋白；3和4為純化的G6PD）；(B)、(C)、(D)分別為pH、溫度和pH穩(wěn)定性對草魚肝胰臟G6PD活性的影響

本文編號：4005111