內質網是真核細胞中蛋白質合成、折疊與分泌的重要細胞器,它的內環境穩定是細胞維持正常功能的基本需求。在某種環境因素刺激下,合成后蛋白質在內質網中發生錯誤的折疊和修飾,導致其穩態失衡,形成內質網壓力(endoplasmic reticulum stress, ER stress)。細胞內存在一系列信號轉導通路,對內質網壓力實行應答,這些應激通路一般稱為錯誤折疊蛋白質應激(unfolded protein response, UPR)。肌醇需求蛋白質1(inositol-requiring protein-1, IRE1)是一個內質網膜蛋白質,是UPR中三個重要的內質網壓力感受器和信號傳導蛋白質之一。盡管人們對IRE1的分子機制已有相當程度的了解,但是有關IRE1與其他蛋白質的相互作用、它的信號通路調控、以及翻譯后修飾的可能性等方面的知識依然匱乏。本課題以IRE1為研究對象,通過蛋白質互作分析,發現IRE1相互作用的蛋白質,進而聚焦于IRE1相關的修飾和信號通路,試圖發現和闡明內質網壓力條件下IRE1的新功能和可能的分子機制。利用蛋白質組學的方法,我們在IRE1的免疫共沉淀物中發現了若干泛素...

【文章頁數】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
專業詞匯中英文對照表
第一章 緒論
    1.1 內質網的結構和功能
        1.1.1 內質網的分類與結構
        1.1.2 內質網的功能
    1.2 內質網壓力與錯誤折疊蛋白應激
        1.2.1 內質網壓力與錯誤折疊蛋白應激概述
        1.2.2 三條UPR通路
    1.3 內質網相關的蛋白降解
    1.4 內質網壓力和腫瘤的關系
        1.4.1 IRE1通路在腫瘤中的作用
        1.4.2 PERK通路在腫瘤中的作用
        1.4.3 ATF6通路在腫瘤中的作用
    1.5 內質網壓力和衰老
        1.5.1 內質網壓力與衰老的關系
        1.5.2 UPR在衰老過程中的作用
    1.6 細胞老化
        1.6.1 復制性老化和成熟前老化
        1.6.2 調節細胞老化的信號通路和分子機制
        1.6.3 細胞老化與腫瘤的關系
        1.6.4 細胞老化和衰老的關系
    1.7 泛素和泛素化系統
        1.7.1 泛素和泛素化過程
        1.7.2 泛素化鏈接方式
    1.8 泛素化酶CHIP的結構和功能
        1.8.1 CHIP的結構
        1.8.2 CHIP的功能
    1.9 本論文研究的目的
第二章 IRE1結合蛋白的鑒定與驗證
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 IRE1結合蛋白的免疫沉淀及質譜鑒定
        2.3.2 IRE1與CHIP相互作用的驗證
    2.4 小結
第三章 CHIP對IRE1作用的分子機制研究
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗方法
    3.3 實驗結果
        3.3.1 CHIP在體內泛素化IRE1
        3.3.2 CHIP對IRE1的泛素化修飾方式的研究
    3.4 小結
第四章 CHIP對IRE1的激酶活性及信號通路的影響
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗方法
    4.3 實驗結果
        4.3.1 GA引起的內質網壓力對IRE1的激活的影響
        4.3.2 CHIP對IRE1下游相關通路的影響
        4.3.3 IRE1的泛素化修飾對其激酶活性和IRE1/TRAF2/JNK通路的影響
        4.3.4 去泛素化酶OTUB1對IRE1/TRAF2/JNK通路的影響
        4.3.5 CHIP對其他UPR通路的影響
            4.3.5.1 CHIP對ATF6通路的影響
            4.3.5.2 CHIP對PERK通路的影響
    4.4 小結
第五章 IRE1/TRAF2/JNK通路在細胞老化過程中的作用
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗方法
    5.3 實驗結果
        5.3.1 IRE1/TRAF2/JNK通路對細胞老化的作用
        5.3.2 CHIP在細胞老化中的作用
    5.4 小結
第六章 討論
基本結論
參考文獻
作者簡介及在學期間發表的學術論文與研究成果



本文編號：3988672