背景與目的:幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)的高感染率及其嚴重的危害性,使Hp疫苗成為當今研究的熱點之一。隨著疫苗研究的深入,應用混合抗原成分制備Hp疫苗將是未來Hp疫苗研究的趨勢。細胞內感染性細菌減毒后作為DNA疫苗載體是目前基因疫苗研究的熱點之一。沙門氏菌(Salmonella typhimurium)是一種較為常見的侵襲性胞內菌,通過基因工程方法減毒后對宿主致病性顯著降低,但仍保留良好的侵襲力,可直接將表達質粒攜帶進入動物細胞內表達相應的蛋白而誘導特異性的免疫應答反應。但由于其質粒中含有抗生素抗性基因,盡管其在體外試驗有效,在人體內卻無法應用,Nakayama等構建的平衡致死系統解決了這一問題。本課題擬構建幽門螺桿菌BabA2/UreI融合基因雙價DNA疫苗,首先通過基因工程技術構建含asd基因的重組原核表達質粒,并利用沙門氏菌asd平衡致死系統,最終獲得表達重組人BabA2/UreI融合基因蛋白的重組沙門菌減毒疫苗株x8501(pYA3342/BabA2/UreI),并檢測目的蛋白的表達和抗原性,為制備預防Hp感染的DNA疫苗奠定基礎。 方法:①Ba...

【文章頁數】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1pYA3342的物理圖譜

2.2.1.2質粒表達質粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠贈，其物理圖譜見圖2已構建好的真核表達質粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大學第一附屬醫院化病研究所制備[27,28]，其物理圖譜見圖2.2；載體pC....

圖2.2pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI的物理圖譜

2.2.1.2質粒表達質粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠贈，其物理圖譜見圖2已構建好的真核表達質粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大學第一附屬醫院化病研究所制備[27,28]，其物理圖譜見圖2.2；載體pC....

圖2.4重組質粒pYA3342lBabA2/tJreI構建示意圖

圖2.5PCR擴增BabA2/UreI融合基因

圖2.5PCR擴增BabA2/UreI融合基因圖2.6酶切pCF-T/BabA2/UreI融合質粒A：DNAMarkerA：DNAMarkerB：PCR擴增BabA2/UreI融合基因產物B：SmaI和SalI分步進行雙酶切的結果2.3.1.2pCF-....

本文編號：3996483