腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNFα)具有對某些惡性腫瘤的抑制或殺傷作用，也是致內毒素性休克、急性移植物抗宿主病及一些自身免疫病的重要效應因子，因此TNFα的改造和TNFα拮抗劑的研究受到各國學者的重視。重組TNFα及其拮抗劑(包括抗TNFα單抗、抗TNFα受體單抗、可溶性TNFα受體、TNFα突變體)均已應用于臨床并取得了一定的治療效果。但單抗的人源化、重組細胞因子或受體的純化、不同程度的抗原性及價格因素等均成為上述制劑在國內應用的制約因素。近年來的研究發現，小分子細胞因子模擬物具有細胞因子受體激動劑或拮抗劑的作用，且小分子模擬物因容易合成并能夠給予高濃度、可口服等優點使其具有更加廣闊的研發與應用前景。篩選TNFα小分子模擬肽及結合肽對于TNFα研究具有重要的意義。本研究包括以下四個方面： 1、TNFα結合肽的研究：以rhTNFα為靶對噬菌體環七肽庫進行篩選，以尋求可拮抗TNFα活性的小分子短肽。三輪篩選后，隨機挑選23個噬菌體克隆經ELISA鑒定，其中11個克隆顯示可與TNFα有較強的結合，DNA測序結果推導氨基酸序列，其中兩個克隆的氨基...

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一1噬菌體克隆與rhTNFa的結合

物加入到rhTNFa包被的酶標孔內，固相表面的rhTNFa與液相中的th飛NFa競爭與噬菌體克隆結合，以此來鑒定所篩選的噬菌體克隆是否位點準確即是否確實和TNFa結合(見圖1一2):

圖2一1噬菌體克隆與包被TNFamAb的結合

試驗結果顯示陽性克隆均與TNFamAb具有較強的結合活性(見圖2一2):

圖2一2TNFamAb與噬菌體克隆的結合

斷陽性噬菌體克隆LCS一7與TNFamAb之間的結合，借此測定陽性噬菌體克隆是否模擬rFNFa的表位與相應的受體結合。設定低表達r1NFa受體的CHO細胞為陰性對照。計算抑制率(見圖2一3):

圖3一1正常包被組噬菌體克隆與TNFa的結合

No.ofPhageelonesNol一20:Phageelone，No21:unrelatedPhageelone，No22:12一merPePtidelibrary圖3一2甲醛固定組噬菌體克隆與TNFa結合試驗Fig.3一2BindingofrhTNFawith12merPh....

本文編號：3999210