背景:由于各種社會因素,高齡產婦所占比例逐年增加,伴隨而來的是生育能力的降低,其中女性的卵巢功能降低、卵泡數量減少、卵泡質量下降是其中的重要原因。卵泡是卵子發生的場所,卵母細胞經過卵子發生的過程才能具有受精能力。卵泡發育異常會直接影響到卵母細胞的生長、成熟、受精及胚胎發育。本文通過模型動物即10-12月齡BDF1雌鼠模擬38-42.5周歲的高齡產婦,為其生育能力的研究提供借鑒和參考。方法:為了研究高齡小鼠與年輕小鼠之間存在的繁殖能力差異,分別從生理學、組織學、細胞學、發育生物學、表觀遺傳及分子生物學等方面進行了對比分析。通過觀測發情周期、測定生殖激素含量研究了其生理學差異;利用組織學切片研究了雌鼠生殖器官的組織學差異;利用免疫熒光技術,通過激光共聚焦顯微鏡,對比研究了染色質構型、細胞凋亡及線粒體分布等細胞學差異;用亮甲酚藍(Bright cresyl blue,BCB)染色檢測其細胞代謝活性,用孤雌激活、RT-qPCR及體細胞核移植技術對比研究了重編程及發育潛能;用免疫熒光分析H3K36me3的表達,研究表觀遺傳差異。結果:與年輕小鼠相比,高齡小鼠的發情周期明顯縮短(Aged=3.31±0.10 d,Young=4.78±0.16 d,P0.05),同時也存在輸卵管結構紊亂、上皮組織脫落和上皮空泡退化的現象;兩組小鼠存在凋亡程度和線粒體分布的顯著差異;但是采用體內成熟卵檢測的核重編程能力和發育潛能結果表明,兩組之間并無顯著性差異(P0.05);高齡小鼠H3K36me3修飾異常(P0.05);高齡小鼠體內成熟卵Oct4表達有顯著性差異(P0.05),而Cdx2、Nanog、Sox17的表達未出現差異顯著性。在卵子發生過程中,Germinal vesicle(GV)卵母細胞被分為兩種構型,即染色質彌散分布的Non-surrounded nucleolus(NSN)構型,和染色質凝縮并圍繞核仁分布的Surrounded nucleolus(SN)構型。通過對未成熟卵進一步細分,我們發現,高齡小鼠的SN構型卵母細胞表現出顯著的線粒體凝集,細胞凋亡和異常的H3K36me3,而NSN構型卵母細胞除了凋亡程度有差異外幾乎沒有受到影響。總之,研究結果表明,雖然在高齡雌性小鼠中較低的E2含量導致發情周期縮短和卵泡質量下降,導致未成熟卵母細胞質量降低,特別是在SN型卵母細胞中,但是卵母細胞的發育潛能在高齡雌性小鼠中是正常的。這可能為高齡女性生殖帶來了新的希望,為輔助生殖提供了新的研究策略。
【學位單位】：阜陽師范學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

人鼠年齡對照表

Elisa試劑盒加樣設計

固定針使用方法
【參考文獻】

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1 喬利敏;亮甲酚藍（BCB）染色法預測牛卵母細胞未來發育能力的研究[D];甘肅農業大學;2009年

本文編號：2886696