【摘要】：目的:探討綿羊肌源性干細(xì)胞(MDSC)與陰道平滑肌細(xì)胞(VSMC)共培養(yǎng)分化為平滑肌的可行性。方法:利用Transwell細(xì)胞龕室建立MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型,共培養(yǎng)2d、4d、6d,收集MDSC。Western blot法檢測干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin及平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA的表達(dá)情況。結(jié)果:利用Transwell細(xì)胞龕室成功構(gòu)建MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型。免疫熒光法及Western blot法檢測發(fā)現(xiàn),隨著共培養(yǎng)時間延長,共培養(yǎng)組MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin表達(dá)逐漸下降,但培養(yǎng)6d仍有表達(dá),平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物aSMA逐漸增多。結(jié)論:Transwell細(xì)胞龕室成功構(gòu)建綿羊MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型,達(dá)到了真正意義上分開兩種細(xì)胞的同時,兼顧了細(xì)胞間相互影響的共培養(yǎng)環(huán)境,在體外證實了綿羊MDSC分化為平滑肌細(xì)胞的可行性。
【圖文】：

翁?閻鸞ソ詠?VSMC。見圖1。2．2Westernblot法檢測綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后MDSC中細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)情況共培養(yǎng)6d時，干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin在共培養(yǎng)組MDSC中仍有表達(dá)，但表達(dá)量隨著時間延長而下降，與MD-SC單獨培養(yǎng)組比較，表達(dá)量顯著下降(P＜0．05)。隨著MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)下降的同時，平滑肌細(xì)胞抗體a-SMA表達(dá)量逐漸上升;但共培養(yǎng)6d時，a-SMA表達(dá)量仍低于VSMC單獨培養(yǎng)組(P＜0．05)。表明通過與VSMC共培養(yǎng)，MDSC一部分可逐漸被誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞，同時仍有少部分MDSC保持著干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。見圖2。圖1Transwell細(xì)胞龕室體外模擬MDSC與VSMC共培養(yǎng)(×10)A、B:分別為對照組MDSC1、4d;C、D:共培養(yǎng)組MDSC1、4d;E:VSMC單獨培養(yǎng)4d圖2Westernblot法檢測Desmin和a-SMA表達(dá)對照組MDSC:MDSC單獨培養(yǎng)組培養(yǎng)6d;對照組VSMC:VSMC單獨培養(yǎng)組培養(yǎng)6d3討論共培養(yǎng)是目前細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域常用的一項技術(shù)［4－5］。既往研究［6，3］利用HoechsG3342染料對MDSC細(xì)胞核進行標(biāo)記，再與陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)2d，檢測MDSC表達(dá)平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA表達(dá)情況。但此法存在一些局限性:(1)Ho-echsG3342染料對MDSC細(xì)胞核染色時間有限，僅能了解共培養(yǎng)2d的情況，無法進行更長時間的觀察;(2)MDSC與平滑肌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞融合(即MDSC的細(xì)胞核進入平滑肌細(xì)胞中)，也可出現(xiàn)核染色陽性。此時，MDSC并未分化為平滑肌細(xì)胞，但由于細(xì)胞核在平滑肌細(xì)胞中，因此該細(xì)胞也表現(xiàn)出核染色陽性且可檢測到a-SMA表達(dá)，導(dǎo)致假陽性;(3)該法難以分離共培養(yǎng)后的MDSC，故無法確切了解MDSC誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞的情況。因此，a-SMA是否均為MDSC誘導(dǎo)分化后新表達(dá)出的標(biāo)記物仍待商榷。本研究通過Transwell細(xì)胞龕室首次建立了綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)體外模型，模

?上赴?曇俏顳esmin在共培養(yǎng)組MDSC中仍有表達(dá)，但表達(dá)量隨著時間延長而下降，與MD-SC單獨培養(yǎng)組比較，表達(dá)量顯著下降(P＜0．05)。隨著MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)下降的同時，平滑肌細(xì)胞抗體a-SMA表達(dá)量逐漸上升;但共培養(yǎng)6d時，a-SMA表達(dá)量仍低于VSMC單獨培養(yǎng)組(P＜0．05)。表明通過與VSMC共培養(yǎng)，MDSC一部分可逐漸被誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞，同時仍有少部分MDSC保持著干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。見圖2。圖1Transwell細(xì)胞龕室體外模擬MDSC與VSMC共培養(yǎng)(×10)A、B:分別為對照組MDSC1、4d;C、D:共培養(yǎng)組MDSC1、4d;E:VSMC單獨培養(yǎng)4d圖2Westernblot法檢測Desmin和a-SMA表達(dá)對照組MDSC:MDSC單獨培養(yǎng)組培養(yǎng)6d;對照組VSMC:VSMC單獨培養(yǎng)組培養(yǎng)6d3討論共培養(yǎng)是目前細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域常用的一項技術(shù)［4－5］。既往研究［6，3］利用HoechsG3342染料對MDSC細(xì)胞核進行標(biāo)記，再與陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)2d，檢測MDSC表達(dá)平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA表達(dá)情況。但此法存在一些局限性:(1)Ho-echsG3342染料對MDSC細(xì)胞核染色時間有限，僅能了解共培養(yǎng)2d的情況，無法進行更長時間的觀察;(2)MDSC與平滑肌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞融合(即MDSC的細(xì)胞核進入平滑肌細(xì)胞中)，也可出現(xiàn)核染色陽性。此時，MDSC并未分化為平滑肌細(xì)胞，但由于細(xì)胞核在平滑肌細(xì)胞中，因此該細(xì)胞也表現(xiàn)出核染色陽性且可檢測到a-SMA表達(dá)，導(dǎo)致假陽性;(3)該法難以分離共培養(yǎng)后的MDSC，故無法確切了解MDSC誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞的情況。因此，a-SMA是否均為MDSC誘導(dǎo)分化后新表達(dá)出的標(biāo)記物仍待商榷。本研究通過Transwell細(xì)胞龕室首次建立了綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)體外模型，模擬MDSC在VSMC環(huán)境下的擴增和分化情況。Transwell細(xì)胞龕室通過多孔膜，下層培養(yǎng)液中的成分可影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可研?
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本文編號：2891784