目的:探討水通道蛋白-4(Aquapofins-4,AQP4)和神經(jīng)元素-3(Neurogenin3,Ngn3)在創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)后腦組織中的表達及分布,探索其在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用及調控機制,為創(chuàng)傷性腦損傷后腦水腫的預防及臨床治療以及神經(jīng)再生與神經(jīng)功能恢復的研究提供實驗室依據(jù)。方法:隨機將30只健康成年SD大鼠(雌雄均有、體質量280-300g)分為正常對照組(5只)和創(chuàng)傷性腦損傷模型組(25只),模型組再分為5個亞組(每組5只)。10%的水合氯醛3.5 ml/Kg腹腔麻醉后,采用自制改良的marmarou自由落體打擊器撞擊大鼠頭部,建立大鼠創(chuàng)傷性腦損傷模型(TBI),分別于6h、1d、2d、5d、7d收集模型組腦組織及正常對照組腦組織進行組織學處理,模型組與正常對照組均采用免疫組織化學SABC法染色觀察AQP4和Ngn3在腦組織中的表達及分布,Western-blot檢測AQP4、Ngn3蛋白在創(chuàng)傷性腦損傷后腦組織中的表達及變化。結果:AQP4在正常大鼠腦組織中不表達或表達較弱,陽性反應主要分布在腦組織中的血管內皮及膠質細胞;Ngn3在正常大鼠腦組織主要表達于室管膜上皮。TBI模型組6 h時,AQP4在腦組織內的表達無明顯變化,和正常對照組比較,無統(tǒng)計學差異(P0.05),1 d時AQP 4大量表達于髓質、毛細血管內皮及神經(jīng)膠質,2 d時表達開始下降,5 d時表達再次出現(xiàn)高峰,1 d后AQP4在模型組的表達與正常對照組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組6 h時,大腦皮質可見少量的Ngn3陽性神經(jīng)元,局灶性聚集或散在分布,1 d時海馬區(qū)出現(xiàn)少量未分化的大顆粒細胞呈Ngn3陽性,5 d時海馬區(qū)Ngn3陽性細胞數(shù)量達到高峰,高表達狀態(tài)持續(xù)至第7 d,模型組各時段Ngn3的表達與正常對照組比較存在差異,并具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:AQP4在創(chuàng)傷性腦損傷中的表達水平直接影響著與腦水腫的程度,對腦水腫的發(fā)生、發(fā)展具有重要的調控作用,在腦水腫的預防和靶向治療上具有重要的臨床意義;創(chuàng)傷性腦損傷后,Ngn3在皮質區(qū)神經(jīng)元呈短暫性表達,可能與腦損傷的應激及神經(jīng)元損傷有關,海馬區(qū)未分化的大顆粒細胞可能為神經(jīng)干細胞,其分化可能參與腦損傷后的神經(jīng)元再生。
【學位單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R651.15
【部分圖文】：

玻璃導管被牢固固定于鐵支架臺上，頂端安置一個定滑輪裝置，玻璃導管下方離實驗臺面 15 cm 處放置金屬承重臺及麻醉后實驗大鼠。細魚絲線懸吊砝碼使其底部處于水平狀，底面與大鼠頭部擺放部位相平行，以保證打擊時撞擊面處于水平。大鼠頭頂部固定 頭盔 ，可避免局部顱骨損傷，同時可以使砝碼對大鼠頭顱的打擊力呈彌散分布，造成大腦組織彌散損傷。所有實驗動物均選擇 10% 的水合氯醛 3.5 ml/Kg 腹腔麻醉，模型組根據(jù)傷后時間 6h，1d，2d，5d，7d 麻醉后斷頸處死取材（腦組織），每個時間點另取1 只 SD 大鼠作為正常對照組麻醉后斷頸處死取材（腦組織），一部分采用 10%的中性福爾馬林固定液固定，一部分置于消毒凍存管凍存于 -86℃ 冰箱保存。圖 1 創(chuàng)傷性腦損傷模型打擊裝置Fig 1 Strike device of traumatic brain injury model

大理大學碩士學位論文第 3 章 結 果3.1 形態(tài)學觀察3.1.1 大體形態(tài)觀察正常對照組大腦形態(tài)完整，色澤明亮，被膜下無點狀出血，血管走行及質的溝回紋理清晰（圖 2A）；模型組大腦形態(tài)完整，色澤暗紅，可見腦實血、呈水腫樣，局部有腦實質挫裂傷改變，血管走行及腦實質溝回紋理模糊2B）。

可見腦實質充血、呈水腫樣，局部有腦實質挫裂傷改變，血管走行及腦實質溝回紋理模糊（圖2B）。3.1.2 顯微形態(tài)觀察H-E 染色后顯微鏡下觀察，正常對照組大腦皮質及海馬區(qū)組織清晰、結構完整，神經(jīng)元密集、排列整齊，神經(jīng)細胞胞漿豐富，胞質染色淡，細胞核居中，核仁明顯，海馬區(qū)顆粒層邊緣可見少量未分化的大顆粒細胞，胞漿豐富（圖3A-B）。 TBI 模型組大腦皮質和海馬區(qū)結構神經(jīng)細胞排列凌亂，神經(jīng)細胞數(shù)量圖 2A 正常對照組大鼠腦外觀形態(tài)。Fig 2A Brain appearance of normalcontrol group rats.圖 2B TBI 模型組（1 d）大鼠腦外觀形態(tài)，“↑”示腦挫裂區(qū)。Fig 2B Brain appearance of TBI rats modelafter 1d. “↑” showing contusion andlaceration of brain.AB
【參考文獻】

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1 陳梅花;陳貴珍;賈萬鈞;孫汝亮;胡丙杰;;改良大鼠彌漫性腦損傷實驗模型[J];中國比較醫(yī)學雜志;2013年07期

2 張巧梅;謝亞寧;王強;;Neurogenin基因家族對疾病治療前景的研究進展[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2013年02期

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本文編號：2868861