目的： 探討急性肝衰竭（ALF）大鼠模型腸道防御素-5(RD-5)、分泌型磷脂酶A2（sPLA2）和溶菌酶(Lysozyme)表達變化及與細菌移位的關系。 方法： 清潔級常規喂養雄性SD大鼠，1周后隨機分為正常對照組和ALF模型組。正常對照組8只，腹腔注射0.9%氯化鈉溶液1.2ml/100g；ALF模型組40只，按造模后不同觀察時間點分為8、16、24、48、72小時5個時間亞組，每組8只，一次性腹腔注射10%D-氨基半乳糖1.2ml/100g。于各相應時間點處死大鼠，進行以下指標檢測：①取各組肝、脾和腸系膜淋巴結組織勻漿進行細菌培養；②檢測血清ALT、AST、Tbil、Alb水平；③肝組織和末段回腸組織經HE染色后光鏡下觀察病理變化；④RT-PCR法檢測各組末段回腸RD-5、sPLA2、LysozymemRNA表達；⑤Western blot和免疫組化法檢測sPLA2和Lysozyme蛋白表達。組間均數比較采用單因素方差分析。 結果： 1、急性肝衰竭模型組ALT、AST逐漸升高，于48h達到高峰，并出現總膽紅素明顯升高，隨后轉氨酶下降，總膽紅素繼續上升。模型組72h肝臟組織正常結構消失，呈大片融合壞死，超過整個切片面積的2/3，殘留少量肝細胞，匯管區及壞死區可見大量炎性細胞浸潤，肝竇充血、出血明顯，符合急性肝衰竭病理改變，成功誘導急性肝衰竭模型。 2、正常對照組未出現臟器細菌培養陽性，模型組24h、48h和72h臟器細菌移位率分別為8.3%、37.5%和58.3%，但是，72h大鼠模型的末端回腸結構尚完整，未見粘膜上皮細胞明顯脫落壞死情況。 3、模型組大鼠回腸RD-5、sPLA2mRNA在早期逐漸升高，16h上升至高峰（1.291±0.153、1.131±0.128），與對照組（0.725±0.116、0.722±0.112）比較差異有統計學意義（t=69.25、95.71，均P=0.000），隨后逐漸下降，72h（0.415±0.104、0.425±0.076）明顯低于對照組（t=31.55、44.98，均P=0.000）；對照組LysozymemRNA為0.853±0.093，模型組早期亦升高，8h上升至高峰(1.211±0.107)，最后下降，72h(0.704±0.103），明顯低于對照組（t=9.224；p=0.009）。Western blot法檢測sPLA2和Lysozyme蛋白表達，對照組分別為0.583±0.121和0.650±0.093，模型組72h分別為0.327±0.086和0.382±0.057，均明顯低于對照組（t=12.28、15.83，p=0.004、0.001）。sPLA2蛋白在對照組回腸潘氏細胞內呈粗顆粒棕色信號，而在模型組72h時僅可見少量點狀棕色信號分布；Lysozyme蛋白在對照組回腸所有潘氏細胞中呈粗顆粒強信號，而在模型組72h時在部分潘氏細胞中呈散在點狀信號。 結論： 急性肝衰竭大鼠模型的回腸粘膜免疫屏障功能下降，隨著潘氏細胞RD-5、sPLA2和Lysozyme的表達下降，臟器細菌移位率增加，且不伴有明顯腸粘膜損傷的發生。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R575.3
【部分圖文】：

圖 1 肝臟和末段回腸組織病理檢查結果和末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白的表達。A常對照組肝臟（HE×200）；B：模型組 72h 肝臟（HE×200）；C：正常對照組末段回腸HE×200）；D：模型組 72h 末段回腸（HE×200）；E：正常對照組回腸 Lysozyme 蛋白的達（DAB ×400）；F：模型組 72h 回腸 Lysozyme 蛋白的表達（DAB ×400）；G：正常照組回腸 sPLA2 蛋白的表達（DAB ×400）；H：模型組 72h 回腸 sPLA2 蛋白的表達（DA400）。

第 3 章 結果計學意義（t=69.25、95.71，均 P<0.01），隨后逐漸下降，72h（0.41.076）明顯低于對照組（t=31.55、44.98，均 P<0.01）；對照組 為 0.853±0.093，模型組早期亦升高，8h 上升至高峰（1.211±0.172h(0.704±0.103）明顯低于對照組（t=9.224；p<0.01）

3 Western blot 檢測末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白水平。1 為正常對照組；2～6 分別型組 8、16、24、48、72h。與對照比相比，**P<0.01，*P<0.05。.6 急性肝衰竭大鼠末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白免疫組織化學色sPLA2、Lysozyme 蛋白分布于腸隱窩潘氏細胞內。sPLA2 蛋白在對照組潘氏細胞內呈粗顆粒棕色信號，而在模型組 72h 時僅可見少量點狀棕色信布；Lysozyme 蛋白在對照組回腸所有潘氏細胞中呈粗顆粒強信號，而在模 72h 時在部分潘氏細胞中呈散在點狀信號（圖 1）。
【參考文獻】

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1 李鋼;胡祖健;王凱誠;羅靜;趙金鋒;劉世賓;嚴萍;陳海平;;實驗性重癥急性胰腺炎對SD大鼠小腸防御素-5基因表達的影響[J];肝膽胰外科雜志;2007年06期

2 趙希敏;劉霞;;顱腦損傷大鼠腸道防御素-5 mRNA表達[J];臨床神經外科雜志;2007年01期

3 劉冬妍;丁鵬;劉沛;;急性肝壞死動物模型腸道SIgA的變化[J];中國醫科大學學報;2010年08期

本文編號：2844461