目的HSP100/ClpATPase是一類高度保守而且廣泛存在的熱休克蛋白（heat shockprotein, HSP），屬于AAA+（ATPase associated with diverse cellular activities）蛋白超家族，具有多種生物學功能。他們可以與蛋白酶ClpP結合形成ATP依賴的蛋白酶復合體促進特異的底物蛋白質的水解，而ClpATPase決定了ClpP的裂解功能和降解底物的特異性[3]。大量研究已證實ClpATPase在許多病原菌的致病過程中發揮了重要作用。在金黃色葡萄球菌，ClpX缺陷株的毒力顯著降低，這種作用主要是通過調節主要毒力因子的表達來實現的[8]。在單核細胞增多性李斯特菌，ClpC通過調節侵襲相關毒力因子的表達參與細菌粘附侵襲宿主細胞的過程[10]。我們課題組前期對肺炎鏈球菌ClpE的研究發現：在小鼠腹腔感染模型clpE缺陷肺炎鏈球菌的致病能力明顯降低。那么ClpE影響細菌致病的機制如何呢？即它是通過對哪些毒力因子的影響作用而調控細菌相應的毒力表現呢？要想弄清這些問題，就必須尋找到與ClpE有相互作用的特異性蛋白底物。本研究擬通過目前應用... 

【文章來源】：重慶醫科大學重慶市

【文章頁數】：95 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ClpEPCR擴增產物

圖 1 ClpE PCR 擴增產物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker圖 2 重組表達載體的雙酶pET28a-ClpE，泳道 2：Fig.2 Identification of the Lane 1: pET28a-ClpE digested by EcoRI/SalI M2.2 rClpE 的大腸桿菌表達與純化與未誘導菌相比，含重組質粒 pET28a-ClpE 的 BL21 菌增粗的蛋白條帶，位置在 80kDa 左右，與預期相符（圖 3的形式存在。采用鎳柱親和層析純化后，SDS-PAGE 顯示（圖 4），純度在 85%左右，超濾除咪唑后可用于多克隆抗

圖 1 ClpE PCR 擴增產物。泳道 1：ClpE 基因片段Fig.1 PCR products for clpE Lane 1：ClpE products M：DNA Marker圖 2 重pET28Fig.2 ILane digeste2.2 rClpE 的大腸桿菌表達與純化與未誘導菌相比，含重組質粒 pET28增粗的蛋白條帶，位置在 80kDa 左右，的形式存在。采用鎳柱親和層析純化后，（圖 4），純度在 85%左右，超濾除咪唑

【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用限制性顯示PCR技術構建細菌poly(A)化mRNA的cDNA文庫[J]. 胡子有,馬文麗,宋艷斌,張寶,鄭文嶺.  生物技術通訊. 2002(04)



本文編號：2897682