目的構建用于阿尼昂尼昂熱核酸檢測的病毒樣顆粒質控品,并對其進行評價。方法體外合成MS2噬菌體和阿尼昂尼昂病毒相關基因,通過酶切連接的方式構建表達載體,IPTG誘導表達并經Co柱純化獲得病毒樣顆粒,同基質混合后制成質控品,采用熒光RT-PCR方法對質控品的均勻性、運輸穩定性、保存穩定性和凍融穩定性進行系統評價。結果成功構建pET-MS2-ONNV表達載體并獲得了純化的病毒樣顆粒。制備的質控品無質粒DNA污染,均勻性測試時變異系數為1.25%,往返運輸后Ct值變化不明顯,可在4、-20、-70℃條件下保存至少30 d,并可經受8次反復凍融。結論本研究獲得了均一、穩定、耐凍融的阿尼昂尼昂熱核酸檢測病毒樣顆粒質控品,對阿尼昂尼昂熱的防控具有重要意義,也為其它類似傳染病病原體的質控品構建和評價提供了一個可行的方法。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要試劑
        1.1.2 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 表達載體構建
        1.2.2 病毒樣顆粒的表達與純化
        1.2.3 質控品的制備
        1.2.4 質控品的評價
            1.2.4.1均勻性
            1.2.4.2運輸穩定性
            1.2.4.3保存穩定性
            1.2.4.4凍融穩定性
2結果
    2.1病毒樣顆粒檢測結果
    2.2 質控品的均勻性檢測結果
    2.3 質控品的運輸穩定性檢測結果
    2.4 質控品的保存穩定性檢測結果
    2.5 質控品的凍融穩定性檢測結果
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