哈維氏弧菌是一種棲息在水生和海洋環境的革蘭氏陰性細菌，影響許多水產養殖動物。它是甲殼類動物和誘導養殖對蝦發光弧菌病的病原體，它也是一種魚類病原菌，感染多種物種，給海水養殖業帶來嚴重的經濟損失。目前，水產養殖控制弧菌病主要是依賴抗生素，但由此帶來的各種副作用如細菌耐藥性，環境污染相關聯以及食品安全危害日益明顯。近幾年，人們轉向了從基因工程方向來防治弧菌病。 生物體在代謝過程中會產生少量的自由基，體內的抗氧化系統（抗氧化劑和酶類）能及時清除從而維持自由基代謝平衡。在生物體內，常規生理濃度的活性氧（ROS）是維持正常細胞生理功能所需的，而過量的ROS則會對生物分子造成傷害。超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽還原酶（GR）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽硫轉移酶（GST）等組成了體內微型抗氧化系統，在維持生物體內活性氧（ROS）的平衡具有非常重要的作用，能有效保護細胞免受氧化損傷。 本研究通過同源引物從哈維氏弧菌ZJ0603基因組擴增得GST和GPx基因ORF，將兩個基因分別克隆pMD-18T載體測序，并進行生物信息學分析。GST基因ORF全長615bp，編碼204個氨基酸組成的...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮略詞
1 前言
    1.1 斜帶石斑魚
    1.2 哈維氏弧菌研究進展
        1.2.1 哈維氏弧菌生物學特性
        1.2.2 哈維氏弧菌的致病性與致病機理
        1.2.3 哈維氏弧菌病的防治
    1.3 抗氧化系統與活性氧（ROS）
    1.4 谷胱甘肽系統
        1.4.1 谷胱甘肽及其生理功能
        1.4.2 谷胱甘肽硫轉移酶（GST）
        1.4.3 谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）
    1.5 研究目的及意義
2 GST、GPX 基因的克隆、表達及條件優化
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質粒
        2.1.2 培養基和主要溶液
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑、試劑盒
    2.2 方法
        2.2.1 GST 基因克隆
        2.2.2 GPx 基因克隆
        2.2.3 GST 基因的原核表達
        2.2.4 GPx 基因的原核表達
    2.3 結果
        2.3.1 GST 基因 ORF 擴增
        2.3.2 GST 基因原核表達結果
        2.3.3 GPx 基因 ORF 擴增
        2.3.4 GPx 基因原核表達結果
    2.4 討論
3 GST、GPX 基因亞單位疫苗對斜帶石斑魚的免疫保護性研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 實驗用魚
        3.1.3 實驗儀器及試劑
    3.2 方法
        3.2.1 抗原和攻毒菌株
        3.2.2 重組蛋白對斜帶石斑魚的毒性實驗
        3.2.3 亞單位疫苗對斜帶石斑魚的免疫及攻毒
        3.2.4 ELISA 檢測抗體效價
    3.3 結果
        3.3.1 重組蛋白對斜帶石斑魚的毒性實驗
        3.3.2 抗體效價
        3.3.3 免疫保護率
    3.4 討論
4 GST、GPX 核酸疫苗對斜帶石斑魚的免疫保護性研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 實驗用魚
        4.1.3 實驗儀器及試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 核酸疫苗的制備
        4.2.2 攻毒菌株
        4.2.3 重組質粒對斜帶石斑魚的毒性實驗
        4.2.4 核酸疫苗對斜帶石斑魚的免疫及攻毒
        4.2.5 DNA 水平檢測真核質粒轉染
        4.2.6 mRNA 水平檢測真核質粒轉染
        4.2.7 ELISA 檢測抗體效價
        4.2.8 Western-blot 檢測基因在斜帶石斑魚體內表達
    4.3 實驗結果
        4.3.1 GST 基因真核表達質粒的構建及鑒定
        4.3.2 GPx 基因真核表達質粒的構建和鑒定
        4.3.3 重組真核質粒對斜帶石斑魚的毒性實驗
        4.3.4 抗體效價檢測
        4.3.5 免疫保護率
        4.3.6 DNA 水平檢測真核質粒轉染
        4.3.7 mRNA 水平檢測真核質粒轉染
        4.3.8 Western-blot 檢測
    4.4 討論
5 總結
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介



本文編號：4059191