目的:建立DEACMP大鼠模型,探討HIF-1α及Caspase-9在DEACMP模型大鼠海馬組織中的表達變化情況,為DEACMP發病機制提供實驗基礎。方法:健康雄性SD大鼠156只隨機分為三組:DEACMP組(CO組60只)、假手術組(SO組60只)、空白對照組(BC組36只),其中CO組采用多次間隔腹腔注射CO建立DEACMP大鼠模型,SO組采用相同方法注射等量空氣,BC組不進行任何處理。選取大鼠染毒后1天、3天、7天、14天、21天、28天將各組大鼠分為6個亞組。應用Morris水迷宮實驗測試各組大鼠的平均逃避潛伏期、空間探索。HE染色、Tunel染色、免疫組化及Western-blot法,分別檢測模型大鼠海馬區病理改變、細胞凋亡情況及HIF-1α、caspase-9蛋白表達情況。結果:1.DEACMP大鼠模型的建立:(1)CO組大鼠染毒后出現明顯急性CO中毒反應,皮膚黏膜出現櫻桃紅、煩躁、呼吸急促等。嚴重中毒大鼠出現抽搐、昏迷死亡。染毒大鼠較對照組日常活動減少、嗜睡、反應遲鈍、進食量減少。2.Morris水迷宮實驗結果:各組大鼠染毒前及第7天時平均逃避潛伏期及第IV運動時間差異無統計學意義(P0.05);CO組在染毒后第14天、21天、28天平均逃避潛伏期延長,第IV象限運動時間縮短與染毒前及第7天比較有統計學差異(P0.05);BC組、SO組各時間點組間比較無統計學差異(P0.05)。(2)運動軌跡:SO組、BC組大鼠趨于直線運動,在短時間內找到平臺;CO組大鼠染毒后運動軌跡散亂,找到平臺所需時間長。3.HE染色結果:BC組SO組各時間點海馬區細胞形態正常,細胞排列整齊,約3-4層錐體細胞,細胞膜完整,邊界清楚。CO組海馬區細胞腫脹、細胞數目減少,排列紊亂,細胞間隙擴大,細胞核碎裂、深染、固縮。4.Tunel染色結果:BC、SO組大鼠海馬區各時間點凋亡細胞量少,凋亡指數比較差異無統計學意義(P0.05),CO組在染毒后各時間點凋亡指數均較BC、SO組多,有統計學差異(P0.05),染毒后7天達到凋亡高峰。5.HIF-1α及Caspase-9蛋白的免疫組化染色表達:(1)HIF-1α蛋白表達:HIF-1α在BC組及SO組中各時間點表達較少且差異無統計學意義(P0.05),CO組染毒后HIF-1α各時間點表達量均高于BC組及SO組,第3天達到峰值,組內第3天與各時間點比較有統計學差異(P0.05)。(2)Caspase-9蛋白表達:BC組及SO組中表達少;CO組第1天表達升高,3天達到高峰,隨后逐漸下降,組內第3天與其它時間點比較差異有統計學意義(P0.05)。6.Western Blot方法檢測Caspase-9蛋白的結果:caspase-9激活體的陽性表達在膠片上顯示為黑色條帶,CO組Caspase-9激活體表達較SO組、BC組多;其變化趨勢是CO組1天時表達增多,3天時達到高峰,然后下降。結論:1.多次間隔腹腔注射CO法制備DEACMP模型,是一種研究DEACMP相對理想制備動物模型的方法。2.Morris水迷宮實驗可客觀評價大鼠認知能力,結合大鼠行為學變化、血液中COHb水平,可初步作為大鼠是否發生DEACMP的判定標準。3.急性一氧化碳中毒遲發性腦病的發生可能與海馬神經元遲發性病理損害有關。4.HIF-1α在DEACMP中高表達可促進凋亡相關因子Caspase-9的表達,誘導細胞凋亡,在DEACMP中發揮促進細胞凋亡的作用。
【學位單位】：四川醫科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R595.1;R747.9
【部分圖文】：

膜、四肢肢端皮膚、鼠尾呈現櫻桃紅（見圖 1-1），四肢軟癱、拒食少動等。部分大鼠出現四肢強直（見圖 1-2），抽搐，大小便失禁，甚至昏迷死亡。將大鼠置于通風處 24h 后 CO 組大鼠有 14 只死亡，死亡率 23%，SO 組大鼠腹腔注射空氣精神稍萎靡，持續 5-10min 恢復至正常，BC 組大鼠無行為無異常表現，BC、SO 組大鼠無死亡。將存活大鼠觀察至 28 天發現 CO 組大鼠進食量及活動較 SO、BC 組大鼠減少，反應遲鈍，精神萎靡。對中毒死亡大鼠解剖：血液暗紅，腹腔內臟有大量散在微小出血點，內臟器官腫脹，腦組織充血水腫（見圖 1-3）。符合急性 CO中毒死亡的表現。

膜、四肢肢端皮膚、鼠尾呈現櫻桃紅（見圖 1-1），四肢軟癱、拒食少動等。部分大鼠出現四肢強直（見圖 1-2），抽搐，大小便失禁，甚至昏迷死亡。將大鼠置于通風處 24h 后 CO 組大鼠有 14 只死亡，死亡率 23%，SO 組大鼠腹腔注射空氣精神稍萎靡，持續 5-10min 恢復至正常，BC 組大鼠無行為無異常表現，BC、SO 組大鼠無死亡。將存活大鼠觀察至 28 天發現 CO 組大鼠進食量及活動較 SO、BC 組大鼠減少，反應遲鈍，精神萎靡。對中毒死亡大鼠解剖：血液暗紅，腹腔內臟有大量散在微小出血點，內臟器官腫脹，腦組織充血水腫（見圖 1-3）。符合急性 CO中毒死亡的表現。

圖 1-3 CO中毒后腦組織充血水腫 COHb 濃度檢測結果的股動脈血經全自動血氣分析儀測得染 濃度均＜1%，CO 組大鼠染毒后 2 小時至 50%左右，每次追加注射后 2 小時測復到＞60%。在 4 小時內維持大鼠動脈血 COHb 濃度水平可維持至 16 小時。SO 組測得的動脈血 COHb 濃度始終＜1%。持 CO 重度中毒狀態至少 16 小時 2-1各組大鼠不同時間點 COHb 濃度水平（%
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本文編號：2841108