目的:探討R18多肽聯合亞低溫通過抑制細胞自噬對顱腦創傷（Traumatic Brain Injury,TBI）后神經元的保護作用及機制。方法:1)原代分離培養E18-19 SD大鼠皮質層神經元細胞并將細胞分組:對照組和谷氨酸誘導組。用免疫熒光對原代分離的神經元進行鑒定;用MTS檢測細胞谷氨酸誘導72h后細胞的活力改變。采用落體打擊的方法建立SD大鼠TBI模型,對照組不予以撞擊。在模型建立72h和12d后剝離大鼠腦組織并采用Nissl染色來檢測神經元細胞的損失;從模型建立后第一天開始采用釘板平衡木行走測試對大鼠的行為學進行檢查;同時對大鼠神經功能缺損進行評分（modified neurological severity scores,mNSS）;2)將細胞分為五組:分別為對照組、谷氨酸處理組、亞低溫處理組（32.0?0.5℃）、R18多肽處理組以及亞低溫聯合R18多肽處理組。對照組不施加任何處理因素,谷氨酸處理組為用谷氨酸處理并誘導神經元細胞損傷組,亞低溫處理組、R18多肽處理組以及亞低溫聯合R18多肽處理組為在谷氨酸誘導神經元細胞損傷時分別施加對應的處理因素組,同時,R18多肽設置四... 

【文章來源】：新疆醫科大學新疆維吾爾自治區

【文章頁數】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

神經元的分離、鑒定以及谷氨酸誘導Figure1.1Isolation，identificationandglutamicacidinductionofneuronsA為原代分離的神經元細胞，B為免疫熒光鑒定（Tubulin）C為谷氨酸誘導后細胞活力的改變；**P＜0.01，與對照組相比，差異有統計學意義

圖 1.2 大鼠 TBI 模型的評估Figure 1.2 Evaluation of TBI of rats 為大鼠腦組織 Nissl 染色，B 為經 Nissle 染色后統計的神經元數量，C 為行為學檢數統計；**P＜0.01，與對照組相比，差異有統計學意義。表 1.2 模型建立后不同時間點大鼠 mNSS 評分對比Table 1.2 mNSS scores change of different time point after model establishment模型建立后的時間（d）1 3 5 7 9 rol 2.6±1.1 2.8±0.8 2.8±0.8 2.6±1.1 2.4±1.3 2.6I 8.4±2.9* 13.6±2.3** 7.4±1.1* 6.3±1.5* 5.2±1.1* 4.3P＜0.05，**P＜0.01，與對照組相比，差異有統計學意義。

亞低溫組為谷氨酸誘導的同時將細胞培養箱的溫度調整至 32 0.5℃、R18 多肽聯合亞低溫組為在谷氨酸誘導的同時將用 R18 多肽進行處理并將培養箱的溫度調整至 32 0.5℃，72h 后，用 MTS 法檢測細胞活力，發現與對照組相比，谷氨酸誘導組細胞活力明顯下降；與單純谷氨酸誘導組相比，亞低溫處理組和 R18 多肽處理組細胞的活力升高，且隨著 R18 濃度的升高而升高，并且，R18 多肽聯合亞低溫處理組細胞活力高于單純的亞低溫處理組和單純的 R18 多肽處理組，具體見表 2.1 圖 2.1。表 2.1 R18 多肽和亞低溫能提高神經細胞活力Table 2.1 R18 polypeptide and hypothermia can increase nerve cell viability組別 細胞活力百分比 組別 細胞活力百分比Control 100 0 亞低溫+R18(0.2 M) 29.6 5.6*Glut 13.6 1.8##亞低溫+R18(0.5 M) 53.0 8.0*R18(0.2 M) 23.5 4.9* 亞低溫+R18(1.0 M) 79.1 4.9**R18(0.5 M) 34.5 6.3* 亞低溫+R18(2.0 M) 92.9 2.1**R18(1.0 M) 69.9 3.7** 亞低溫 35.1 6.6*R18(2.0 M) 89.4 1.2**

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃芪甲苷對谷氨酸誘導大鼠海馬神經元損傷的保護作用[J]. 楊岳,王陽,楊景蘭,王佐周,侯偉健.  中藥藥理與臨床. 2015(02)
[2]知母皂苷元對谷氨酸引起的皮層神經元損傷的保護作用研究[J]. 王琦,隋海娟,屈文慧,郁盛雪,金迎新,劉卓,金英.  中國藥理學通報. 2013(02)
[3]阿托伐他汀對谷氨酸引起大鼠神經元損傷保護作用機制的研究[J]. 丁奇,董燕,金英,隋海娟.  中國藥理學通報. 2010(12)

博士論文
[1]鈣池調控的鈣離子內流在高血糖誘導的神經元損傷中的作用機制研究[D]. 徐振寬.山東大學 2016



本文編號：2896170