目的：探討犬骨髓間充質干細胞(MSCs)體外分離、純化、擴增的方法，證實其自我更新能力及多向分化潛能，為細胞移植治療急性心肌梗死(AMI)做準備。 方法：無菌條件下用骨髓穿刺針獲取骨髓液，用密度為1.073g/ml的Percoll分離液通過密度梯度離心法獲取骨髓單個核細胞，用含10%胎牛血清的低糖DMEM培養液種植細胞，通過貼壁篩選法獲得純化的MSCs。細胞生長融合達80%左右時，用胰酶消化傳代細胞，細胞消化、傳代培養三代后，可獲得大量的純度較高的MSCs。對不同代MSCs進行細胞計數，并繪制生長曲線，觀察細胞生長特性。應用流式細胞儀對MSCs表面標記蛋白CD29、CD34進行表面抗原鑒定。取第3代MSCs分別進行成骨組織以及脂肪組織的誘導分化，通過茜素紅以及油紅O染色檢測是否誘導分化為成骨組織以及脂肪組織。 結果：采用密度梯度法獲得犬骨髓單個核細胞，剛分離的細胞體積較小，呈圓形。細胞培養72小時后觀察可見單個或少量成集落樣生長的貼壁細胞克隆，形態大多呈短梭形，原代細胞培養10-12天達到傳代標準。細胞傳代后增殖較快，MSCs生長曲線繪制顯示，MSCs生長曲線呈S型，第6-7天生長達到...

【文章頁數】：93 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
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英文摘要
前言
第一部分 犬骨髓間充質干細胞體外分離、培養及其生物學性質的研究
    1 材料和方法
    2 結果
    3 討論
    4 小結
    參考文獻
    附圖
第二部分 多功能心腔內導管移植骨髓間充質干細胞治療急性心肌梗死的實驗研究
    第一節 多功能心腔內導管移植骨髓間充質干細胞對犬梗死心肌血管新生的影響
        1 材料和方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
        參考文獻
        附圖
    第二節 多功能心腔內導管移植骨髓間充質干細胞對犬心室重構的影響
        1 材料和方法
        2 結果
        3 討論
        4 小結
        參考文獻
        附圖
全文小結
本研究的局限性
文獻綜述一
    參考文獻
致謝
攻讀博士期間發表論文



本文編號：3992621