真核細胞的核膜由內、外兩層脂質膜組成,將細胞核從胞漿內分隔出來,形成具有獨立功能的細胞器。依附于核內膜下的網狀核纖層結構由核纖層蛋白及其相互作用蛋白復合物組成,這些蛋白復合物進一步延伸,在細胞核內形成網狀結構,稱為細胞核骨架。核纖層與核骨架共同為細胞核提供結構支撐,并且在維持正常細胞核功能中發揮重要作用。BCCIP通過與BRCA2、p21等多種功能蛋白相互作用,在細胞有絲分裂、細胞周期調控、DNA同源重組修復、基因組穩定性等方面起著重要作用。本論文研究采用免疫共沉淀和GST融合蛋白沉降技術(GST-pulldown),鑒定了 BCCIP與核纖層蛋白Lamim B1之間的蛋白相互作用。研究中還創新性地構建了 BCCIP條件性表達實驗系統,并利用該系統深入探索了 BCCIP蛋白的全新功能,即在維持細胞核正常功能過程中的作用。實驗結果1.構建了兩種BCCIP條件性表達實驗系統。(1)構建了 BCCIP條件性敲低細胞系(HT-CKD)。該細胞系整合了 U6-LoxP-Neo-LoxP-shRNA 轉基因表達盒(transgene expression cassette),表達 Cre 重組酶可以...

【文章頁數】：104 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１真核細胞的核膜結構模式圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ??

是遺傳物質的復制、膽存、與轉錄遺傳信息的主要場所。??從空間上將細胞核與細胞質區分開來的結構稱為細胞核膜（ｎｕｃｌｅａｒ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ，?ＮＥ）。??如圖１．１所示，在真核細胞中，細胞核膜由內、外兩層平行的脂質膜鵬成，并在特定的??細胞周期將細胞核與細胞質分瞄開來，從而形成相....

圖１．２?Ｌａｍｉｎ蛋白結構??

哺乳動物細胞中還包括微量的Ｌａｍｉｎ?Ａ－５１０口８］，Ｗ及干細胞特有的Ｌａｍｉｎ?Ｃ２口９］??及?Ｌａｍｉｎ?Ｂ?非０］。??如圖１．２所示，Ｌａｍｉｎ具有共同的一級結構１＂心］，即Ｎ末端結構域（頭部）、中間ａ螺??旋桿狀域和Ｃ末端免疫球蛋白樣折疊結構域（尾部，Ｉｇ－化ｅ化Ｉ....

圖１．３?ＢＣＣＩＰ蛋白結構域示意圖??

組中定位于１０ｑ２６．１［７２］。該基因的轉錄產物經選擇性剪切作用產生兩個異構體，并且進??一步翻譯成ＢＣＣＩＰ?ａ和ＢＣＣＩＰ?Ｐ兩個蛋白亞型。??ＢＣＣＩＰ蛋白包含Ｈ個主要結構域（圖１．３），即Ｎ末端酸性結構域（Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌＡｃｉｄｉｃ??Ｄｏｍａｉｎ，?ＮＡＤ）、中....

圖３．２?Ｃｒｅ介導的ＢＣＣＩＰ條件性敲低??

Ｕ６－ｐｌｏｘＰｎｅｏ－ＢＣＣＩＰ?ＳｈＲＮＡ轉基因表達盒，Ｗ及Ｃｒｅ表達是否能夠介導ＬｏｘＰ位點間??ＤＮＡ重組，有效切除新霉素抗性基因編碼序列。??結果如圖３．３所示，ｎｅｏ?（－）組均有細胞克隆形成，表明ＹＦＰ或Ｃｒｅ腺病毒感染后??有活細胞被接種至細胞培養皿中。在ＨＴ１０....

本文編號：4048621