神經干細胞（Neural stem cells, NSCs）是存在于胚胎期神經系統和成體腦組織中的一類具有自我更新和分化成神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞能力的干細胞。神經干細胞不僅對胚胎神經系統發育至關重要，也為各種中樞神經系統的損傷和疾病的治療帶來了希望。通過移植神經干細胞可以在動物或人體中治療帕金森病、亨廷頓舞蹈癥、肌萎縮側索硬化癥、阿茲海默癥、多發性硬化癥、中風和脊髓損傷等神經系統疾病。目前，神經干細胞的體外培養和擴增通常是在常氧即20%的氧濃度條件下進行的，而胚胎發育和成體腦組織中的氧濃度只有3-5%，甚至更低，這種現象被稱作生理性低氧。近年來，越來越多的實驗證據表明低氧對于神經干細胞的增殖和分化具有重要的調節作用。本實驗室的研究結果表明，適度低氧能促進成年動物腦內和離體培養神經干細胞的增殖和分化。因此，研究低氧對神經干細胞存活、增殖和分化的調控具有重要的意義。 低氧誘導因子（Hypoxia-inducible factor, HIF）作為細胞和分子水平的低氧感知分子是低氧信號通路中關鍵的調控分子之一。低氧條件下，細胞中的HIF-1α穩定并轉移至細胞核，通過與低氧反應元...

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【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
    一 神經干細胞
    二 低氧對神經干細胞的影響
    三 低氧調控的分子機制
    四 低氧與 miRNAs
第一部分 低氧對神經干細胞中 miR-210 的表達調控
    一、 實驗材料和試劑
        （一） 實驗動物
        （二） 主要儀器設備
        （三） 抗體
        （四） 主要試劑及常用配方
    二、 實驗方法
        （一） 原代大鼠神經干細胞的分離培養和傳代
        （二） 免疫熒光
        （三） RT-PCR 檢測 mRNA 表達
        （四） Realtime-PCR 檢測 miRNA 表達
        （五） 蛋白提取和 Western blot
        （六） MiR-210-sensor 載體構建
        （七） 細胞存活率分析
        （八） BrdU 摻入檢測細胞增殖率
        （九） TUNEL 試劑盒檢測細胞凋亡
        （十） 雙熒光素酶檢測
        （十一）數據處理與統計學分析
    三、 實驗結果
        （一） 低氧對體外培養 NSCs 中 miR-210 表達的影響
        （二） DNA 甲基化對 miR-210 表達的調控
        （三） MiR-210 對神經干細胞存活的影響
        （四） MiR-210 對神經干細胞凋亡的影響
        （五） MiR-210 對神經干細胞增殖的影響
        （六） MiR-210 靶基因篩選
        （七） 低氧對 HIF-1 及其靶基因 BNIP3 表達的影響
        （八） MiR-210 與 BNIP3 相互作用靶位點的預測與驗證
        （九） MiR-210 對 BNIP3 蛋白表達的影響
        （十） MiR-210 通過 BNIP3 調節低氧下 NSCs 存活
        （十一）MiR-210 抑制 AIF 入核
    四、 討論
    五、 結論
第二部分 低氧對循環 miR-210 分泌的影響及其初步的功能研究
    一、 實驗材料和試劑
        （一） 主要儀器設備
        （二） 實驗動物
        （三） 主要試劑及常用配方
    二、 實驗方法
        （一） Realtime-PCR 檢測循環 miRNA 的表達
        （二） 免疫熒光
        （三） 細胞存活率分析
        （四） 超速離心分離囊泡
        （五） 數據處理與統計學分析
    三、 實驗結果
        （一） 低氧促進神經干細胞分泌 miR-210
        （二） 檢測培養上清中含有循環 miR-210 的囊泡
        （三） 循環 miR-210 對 NSCs 存活的影響
        （四） 低氧對大鼠腦脊液和血液中 miR-210 含量的影響
    四 討論
    五 結論
參考文獻
附錄 Ⅰ. 攻讀博士學位期間論文發表，專利申請以及獲獎情況
綜述
    參考文獻
個人簡歷
致謝



本文編號：4049021