骨骼在機體中具有非常重要的作用,骨發(fā)育與軟骨細胞和成骨細胞的分化功能密切相關。其中成骨細胞是骨發(fā)育、骨形成以及骨改建過程中的主要功能細胞,也是人體骨組織的重要組成成分,在骨形成以及骨量維持中起著關鍵作用。成骨細胞來源于具有多向分化潛能的間充質干細胞,后者經(jīng)過細胞增殖,合成細胞外基質,逐漸成熟及礦化,最終分化成為骨細胞。間充質干細胞(MSC,mesenchymal stem cells)是干細胞家族的重要成員,在生長過程中具有自我復制能力,還具有強大的多向分化潛能。其在分化過程中能夠轉化為脂肪、軟骨、硬骨或者其他類型的細胞。骨的形成是MSCs通過遷移、增殖、分化,在骨吸收部位形成成骨細胞,并介導新骨組織形成的過程,其中MSCs的成骨分化是骨形成的核心過程。一旦成骨細胞分化產(chǎn)生異常,就會對骨發(fā)育與骨重建產(chǎn)生重要影響,會帶來比如骨質疏松等諸多和骨代謝相關的疾病。目前臨床醫(yī)學和基礎醫(yī)學均對MSCs成骨分化機制的研究十分關注,尤其針對調控信號和一些重要的成骨轉錄因子的研究已經(jīng)成為該領域的熱點話題,但對于MSCs的成骨分化原理和分子機制的研究依然存在很多盲區(qū),因此當前對臨床骨代謝相關疾病的治療存在...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
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英文摘要
前言
實驗研究
    1. 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗試劑
        1.4 緩沖液配方及制備方法
        1.5 實驗耗材
    2. 實驗方法
        2.1 鑒定小鼠基因型
            2.1.1 鼠尾DNA的提取步驟
            2.1.2 用PCR的方法鑒定基因型
        2.2 小鼠組織學分析
            2.2.1 小鼠腿骨樣本收樣
            2.2.2 X-射線和Micro-CT掃描分析骨結構
            2.2.3 石蠟包埋和骨組織切片
            2.2.4 HE染色
            2.2.5 TRAP染色
            2.2.6 ALP堿性磷酸酶染色
            2.2.7 PCNA染色
        2.3 小鼠原代成骨細胞培養(yǎng)及功能檢測
            2.3.1 原代成骨細胞的培養(yǎng)
            2.3.2 成骨細胞堿性磷酸酶（ALP）染色
            2.3.3 成骨細胞礦化檢測（Von Kossa）
        2.4 成骨細胞中基因表達量的檢測
            2.4.1 RNA抽提
            2.4.2 逆轉錄反應
            2.4.3 qRT-PCR
            2.4.4 Western印跡實驗
        2.5 小鼠骨架染色
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3. 實驗結果
        3.1 C/EBPα在軟骨細胞特異性敲除后對骨發(fā)育的影響
            3.1.1 C/EBPα f/f;Col2a-cre基因敲除小鼠的表型研究
            3.1.2 C/EBPα影響小鼠生長板的發(fā)育
            3.1.3 C/EBPα影響軟骨細胞的增殖
        3.2 C/EBPα在成骨細胞特異性敲除后對骨發(fā)育的影響
            3.2.1 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的基因型鑒定
            3.2.2 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠表型研究
            3.2.3 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的骨密度降低
            3.2.4 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的骨體積明顯下降
            3.2.5 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠骨吸收能力降低
            3.2.6 C/EBPα在成骨細胞中被有效敲除
            3.2.7 敲除C/EBPα影響成骨細胞功能和礦化能力
            3.2.8 敲除C/EBPα影響成骨細胞分化
    4. 討論和總結
參考文獻
文獻綜述 間充質干細胞成骨分化的研究進展
    參考文獻
致謝
博士期間發(fā)表論文



本文編號：3998208