目的:探究抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大是通過調控AMPK/FOXO3a信號通路和自噬活動及其可能的分子機制。方法:培養H9c2心肌細胞,待生長活力良好時,用含胎牛血清濃度為0.1%的培養基對細胞進行饑餓24h。根據實驗目的分為兩大部分:第一部分將細胞分為4組,分別是Con組:對照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Met)組:抵抗素50 ng/m L加二甲雙胍2 mmol/L組;Met組:二甲雙胍2 mmol/L組。第二部分同樣將H9c2心肌細胞分為4組,依次是Con組:對照組;Res組:抵抗素50 ng/mL組;(Res+Rap)組:抵抗素50 ng/mL加雷帕霉素100nmol/L組;Rap組:雷帕霉素100nmol/L組。用Image J分析細胞表面積;BCA法測定單細胞蛋白含量;實時熒光PCR(RT-qPCR)檢測心肌肥大相關胚胎基因BNF、β-MHC的表達量;Western Blot檢測p-FOXO3a、p-AMPK、p-m TOR、FOXO3a、AMPK、mTOR等通路蛋白表達及自噬相關蛋白Beclin1、LC3表達量。結果:(1)抵抗素能明顯增大H9c2心...

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圖1.抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大的可能機制

3圖1.抵抗素導致H9c2心肌細胞肥大的可能機制。抵抗素可與細胞膜上的TLR4/MD2受體結合，通過細胞內信號轉導激動LKB1/AMPK/TSC2/Rheb信號分子，抑制mTORC1進一步促進了自噬從而導致心肌細胞肥大，此外mTORC1

圖1各組藥物干預后的H9c2心肌細胞形態

2.1.1抵抗素對心肌細胞面積變化的調節作用抵抗素誘導心肌細胞表面積增大，但可以分別被二甲雙胍改善。細胞相應處理36h后，觀察細胞貼壁生長，呈長梭形，胞質豐富，細胞大小可見差異。Con組：（4147±141.7），Res組：（7554±265.2），Res+Met組（....

圖2不同藥物處理心肌細胞36h后，使用ImageJ軟件分析細胞表面積的變化

圖2不同藥物處理心肌細胞36h后，使用ImageJ軟件分析細胞表面積的變化細胞表面積。**表示P<0.01。2.1.2抵抗素對心肌細胞單細胞蛋白含量的調節作用抵抗素誘導心肌細胞蛋白含量增多，但可以分別被二甲雙胍、雷胞相應處理36h后，觀察細胞貼壁生長，....

圖2藥物處理后，各實驗組單細胞蛋白含量

圖2藥物處理后，各實驗組單細胞蛋白含量。抵抗素可以增加單細胞內的0.05。2.1.3抵抗素對心肌細胞胚胎基因的調節作用細胞對應處理36h后，提取RNA反轉錄后實時熒光定量PCR分β-MHC的相對表達量。BNF結果：Con組：1.0，Res組：（10.2±組（2.....

本文編號：4003970