在植物中,水楊酸(SA)作為一種重要的內源激素調控植物的抗病、抗逆、生長發(fā)育和衰老。其代謝機理是SA研究的重要內容之一。在擬南芥中,SA合成和分解代謝路徑尚未被闡述清楚。為了深入揭示水楊酸代謝的分子機制及生理功能,本文利用EMS誘變因SA積累而變小的擬南芥雙突變體s3h*s5h,篩選表型恢復變大的突變體,用正向遺傳學方法克隆SA代謝相關基因。同時通過生物信息學、分子生物學、生物化學、遺傳學等研究方法研究一個水楊酸羥基化代謝候選基因At4g10490(DLO2)的生理學功能。取得的具體研究結果如下:(1)本文利用一種依賴于水楊酸突變體表型篩選水楊酸相關突變體的方法,對EMS誘變的水楊酸積累的擬南芥雙突變體Col-O s3*s5h進行篩選,篩選出表型恢復變大的突變體,建立表型恢復突變體庫。對己篩選出的突變體進行表型、直徑及水楊酸代謝水平進行統(tǒng)計。本文己篩選出20個與水楊酸代謝及葉片衰老相關的突變體,并根據(jù)其表型及水楊酸代謝水平分為四類,分別為:Ⅰ表型恢復變大且葉片晚衰,SA含量降低的突變體;Ⅱ表型恢復變大且葉片晚衰,SA含量與雙突變體s3h*s5h相似的突變體;Ⅲ表型恢復變大且葉片早衰,S...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２?Ｍ２代突變體表型??Ｆｉｇ?２．２?ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?Ｍ２?ｍｕｔａｎｔｓ??

位于ＳＡ誘導早衰的信號通路中，那么該基因突變會抑制早衰的表型。因此我們??采用甲基磺酸乙脂（ＥＭＳ）化學誘變方法，對葉片嚴重早衰的擬南芥Ｈ／？七５／；雙突變體??進行誘變，觀察Ｍ２代植株發(fā)育表型（如圖２．２所示），其中葉片變大和（或）抑制早衰??的突變體即為ＳＡ相關突變體。根據(jù)此....

圖２．４葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體的表型分析??Ａ，２１天ＷＴ、與突變體的表型對比；Ｂ，?２１天ＷＴ、與突變體的直徑對比

??圖２．３．葉片變大和（或）抑制早衰的突變體表型??Ｆｉｇ?２．３?Ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｌｅａｆ?ｍｏｒｐｈｉｎｇ?ａｎｄ／ｏｒ?ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｐｒｅｍａｔｕｒｅ?ａｇｉｎｇ?ｍｕｔａｎｔｓ??２．２．１葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體??在篩選得到....

圖２．６葉片變大、早衰且ＳＡ含量未變的突變體的表型和代謝分析??Ａ，２１天與突變體的表型對比；Ｂ，?２１天ＷＴ、ｄ／ｉｈ５Ａ與突變體的直徑對比；Ｃ，??２１天ＷＴ、■ｄＰｄ／；與突變體的水楊酸代謝分析對比

＾?＾°°８＾§§§§§２§８§§２８??—ｘ〇Ｔ５—？－ｒ〇Ｃ？Ｋ５－＾．ａ）ｈ〇ＣＯ－Ｐ＾ＣＤ—??圖２．５葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體的代謝分析??Ｆｉｇ?２．５?Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｗｉｔｈ?ｌａｒｇｅ?ｌｅａｆ，?ｌａｔｅ....

圖２．９雜交ＦＩ代表型及代謝分析??Ａ，雜交后Ｆ］代表型分析：Ｂ，雜交Ｆ１代代謝分析

ＡｔＵ６－２６＿ｓｇＲＮＡ－ＳＫ基因片段進行連接、轉化，然后按照Ｉ．５．１．２?（７）方法進行菌落??ＰＣＲ驗證，并挑選陽性克隆搖菌提取質粒，按照１．５．１．２?（８）方法對所提質粒進行酶切驗??證。如圖２．１０Ａ所示，菌落ＰＣＲ產(chǎn)物電泳條帶大小為４９９?ｂｐ，與預期大小一致。其....

本文編號：3992959