釀酒酵母不僅細胞內富含各種活性物質,而且其本身也可以作為工程菌產(chǎn)生活性物質。但是酵母具有很厚的細胞壁,細胞內的這些活性物質都被其包圍著,為了更好地利用細胞內的這些物質資源,研究有效的破壁方法特別重要。關于破碎酵母的細胞壁的方法多集中于化學、物理和生物破壁等,但是它們都存在各種各樣的缺點,如化學破壁不僅會使營養(yǎng)物質的結構受到破壞,同時還會對環(huán)境產(chǎn)生惡劣的影響;物理破壁時會產(chǎn)生很大的噪聲污染;生物破壁時所需費用相對較高,而且單一使用呈現(xiàn)的結果并不是很好。目前,利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對酵母的基因進行編輯取得了非常顯著的成果,可以用于酵母基因組的單個或多個基因的突變以及染色體的大片段缺失和基因插入等。因此,在本實驗中,采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),探究目的基因在特定條件下對酵母細胞壁穩(wěn)定性的影響。本實驗對釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因進行編輯,取得了如下結果:1.利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對釀酒酵母2.558菌株基因組中的SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因進行疊加編輯,獲得突變株2.558-IV。2.探究溫度對釀酒酵母突變株2.558-IV細胞壁穩(wěn)定性...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1以2.558為出發(fā)菌進行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因編輯的路線圖

第二章釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因編輯11表2-4所用引物及其序列（續(xù)）Table2-4Primersandsequences引物名稱序列(5`-3`)ROM2RTTGGGAGTAGCATCAGTGGSIT4FCAATAAAGAAATGCCAGGCGSIT....

圖2-2gRNA與Cas9共表達質粒構建電泳圖

河北大學碩士學位論文222.3實驗結果與分析2.3.1SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表達質粒的正確構建分別將SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA敲除組件和pCRCTG418載體用BsaI進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)過回收后，再以一定的比例....

圖2-3轉化子擴增電泳圖

第二章釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因編輯23都可以轉化釀酒酵母。2.3.3陽性轉化子的選擇分別進行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表達質粒的轉化，對平板上長出的菌落和出發(fā)菌分別用plnyzF/R引物進行擴增驗證，出發(fā)菌沒有12....

圖2-5SNF1基因部分序列（突變部位）比對圖

河北大學碩士學位論文24泳檢測結果如圖2-4所示，產(chǎn)物大小都與預期相符。序列比對如圖2-5、2-6、2-7、2-8所示。12M535bp614bp560bp34M圖2-4單基因突變株擴增電泳圖Figure2-4Amplificationelectrophoretogramofth....

本文編號：3994709