胞嘧啶核苷,也稱為胞苷,是核苷類保健食品與藥物重要的原料,市場需求量很大。胞苷主要通過微生物發酵方法獲得,但現有菌株的胞苷發酵水平不高,受到多種因素影響。優化菌株細胞內胞苷的合成代謝方式及提高胞苷分泌效率是提高發酵單位的主要途徑。胞苷可能是通過多種轉運方式進行跨膜轉運的,尿嘧啶通透酶(pyrP,EC3.1.3.104,由pyrP基因編碼,分子量48KDa)和核苷轉運蛋白(NupC,EC2.3.1.256,由NupC基因編碼,分子量43 KDa)可能與胞苷分泌過程有關。本研究通過構建尿嘧啶通透酶和核苷轉運蛋白NupC過表達體系,分析這兩個基因的過表達對菌體細胞生長與胞苷發酵的影響,研究尿嘧啶通透酶和核苷轉運蛋白在胞苷分泌過程的作用,從而不斷提高菌體發酵胞苷的產率。具體研究內容如下:1、異源pyP基因過表達載體構建及其對胞苷發酵的影響。從解淀粉芽孢桿菌BG-09基因組DNA上PCR擴增pyrP基因,并與pSTV28載體進行連接構建質粒載體pSTV28-pyrP。采用化學轉化法將其轉入Escherichia coliBG-08中,得到重組菌E.coliBG-08P。使用0.5 mmol/L ...

【文章頁數】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２胞苷在大腸桿菌中的生物合成途徑［７］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ?ｉｎ?Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ??

尿嘧啶通透酶（；７＞ｒＰ，?ＥＣ?３．１．３．１０４，由砂ｒＰ基因編碼，分子量４８ＫＤａ），解淀粉芽孢??桿菌中尿嘧啶通透酶基因位于嘧啶操縱子的前端，尿嘧啶通透酶和嘧啶的轉運關系密??切，添加其表達劑量將在胞嘧啶的合成中起重要作用。操縱子含有１０個基因，如圖１－３所??不，ｐｙｒ....

圖２－１４胞苷標準品高效液相色譜圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１４?ＨＰＬＣ?ｏｆＣｙｔｉｄｉｎｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ??

２．２．９?ｐＳＴＶ２８質粒的提取??挑取單克隆提取質粒，使用ＴＩＡＮＧＥＮ質粒小提試劑盒（ＤＰ１０３）試劑盒法提取ｐＳＴＶ２８??質粒，提取步驟如圖２－１２。使用前先在漂洗液ＰＷ中加入無水乙醇，將５００?ｍＬ平衡液ＢＬ??加入吸附柱ＣＰ３中（吸附柱放入收集管中），以１２０００?....

圖2-15胞普高效液相色譜圈

Ｆｉｇｕｒｅ?２－１５?ＨＰＬＣ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ??ａ：對照菌；ｂ：重組菌??實驗結果??大腸桿菌五．ｃｏ＂?ＢＧ－０８生長曲線??０．９?－??０．８?？??０．７?？?３＾．?＾?＾??０．６??〇?０．５?／??§〇．?■?／??０３?－?廣??０．２?／??０１?....

圖２－１６￡．ａ？＂ＢＧ－０８生長曲線??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１６?Ｇｒｏｗｔｈ?Ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｅ．ｃｏｌｉ?ＢＧ－０８??－．－

?１０．０??ａｉｃ??圖２－１５胞苷高效液相色譜圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１５?ＨＰＬＣ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ??ａ：對照菌；ｂ：重組菌??２．３實驗結果??２．３．１大腸桿菌五．ｃｏ＂?ＢＧ－０８生長曲線??０．９?－??０．８?？??０．７?？?３＾．?＾?＾??０．６??....

本文編號：3995089