池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)隸屬于軟體動物門、瓣鰓綱,起源于日本,是優質的淡水育珠蚌。當取完珍珠后,其肉質往往被丟棄,未被利用。為了提高池蝶蚌資源利用率,本研究以成熟的池蝶蚌肉質為材料,對其基本營養物質進行分析:新鮮池蝶蚌全臟器含有水分89.68%、粗蛋白5.63%、灰分1.93%、總糖1.24%、粗脂肪0.96%、非蛋白氮0.56%組成。池蝶蚌肉質中糖類和蛋白含量較豐富,為此開展池蝶蚌多糖和酶解相關研究。研究首次選用三種蛋白酶(木瓜蛋白酶、動物蛋白酶、中性蛋白酶)對池蝶蚌全臟器進行酶解,建立相關的工藝流程,獲得上述三種酶解產物。并對酶解產物的基本營養成分和18種氨基酸含量進行檢測分析。設計體外抗氧化實驗,探究其抗氧化能力。研究發現:三種酶解產物均對DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、羥基自由基和超氧自由基具有清除能力,而且清除效果隨著三種酶解產物濃度增加而增強。其中,中性蛋白酶酶解產物對三種指標清除率效果最好。以0.6 mg/mL為例,對DPPH和羥基自由基以及超氧自由基清除率分別為23.8%、37.2%、19.6%,研究表明池蝶蚌酶解產物具有體外抗氧化的能力。實驗設計體外乙醇脫氫酶(ADH)激活率、小鼠醉酒實驗,探究池蝶蚌三種酶解產物對解酒相關生物活性功能。體外ADH激活率結果表明,3.75-150 mg/mL濃度范圍表現出正相關;醉酒實驗結果顯示:中性蛋白酶酶解產物與模型組相比能夠延長耐受時間1.5小時,縮短醉酒時間3小時,以上兩種時間均具有顯著性差異(p0.01);動物蛋白酶酶解產物與模型組相比延長耐受時間0.5小時和縮短醉酒時間2小時,具有顯著性差異(p0.01);木瓜蛋白酶酶解產物組耐受和醉酒時間與模型組相比無顯著性差異(p0.05)。結果表明動物、中性蛋白酶酶解產物對解酒有一定的功效。根據體外抗氧化實驗、ADH激活率實驗和醉酒實驗結果,選用池蝶蚌中性蛋白酶酶解產物,設計抗小鼠急性酒精肝損傷實驗。研究結果表明:中性蛋白酶酶解產物,在150 mg/kg BW劑量下會顯著提高肝臟勻漿中谷胱甘肽(GSH)的含量(p0.01),降低甘油三脂(TG)的含量(p0.01);降低血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)的含量(p0.05)。丙二醛(MDA)含量降低雖不顯著,但隨著酶解產物濃度增加具有一定降低的趨勢。根據《保健食品檢驗與評價判定方法》,肝組織中TG、GSH、MDA任意兩者具有陽性,則說明該物質具有輔助保護肝臟的作用。研究結果表明:池蝶蚌中性蛋白酶酶解產物對酒精誘導小鼠急性酒精肝損傷具有一定的緩解保護作用。本實驗通過熱水乙醇提方式獲得池蝶蚌多糖(HSP-1),設計池蝶蚌多糖(HSP-1)抗腫瘤和修復肝損傷實驗。選用SMCC-7721和SGC-7901細胞株進行實驗,發現池蝶蚌多糖(HSP-1)在低濃度下(100-200μg/m L)對兩者細胞生長有促進作用,超過400μg/m L時出現抑制效果,隨著HSP-1濃度增加,兩種腫瘤抑制率逐步提高,當HSP-1濃度為1000μg/m L,對兩種細胞抑制率僅為12%、11%,抑制效果不顯著。探究HSP-1抗酒精誘導肝損傷時,HSP-1在250mg/kg BW可以顯著降低血清中兩種轉氨酶的含量,在急性肝損傷和非急性肝損傷(4周)都能體現出很好降低兩種轉氨酶(p0.01)。小鼠肝臟勻漿中的甘油三酯(TG)含量顯著降低(p0.05),谷胱甘肽(GSH)的含量比模型組(只灌胃白酒組)顯著升高(p0.05);非急性(4周)肝損傷小鼠肝臟勻漿中MDA含量雖然未顯著降低(p0.05),但隨著池蝶蚌多糖(HSP-1)濃度的增加,對降低MDA含量趨勢月明顯。綜上述實驗結果說明HSP-1對酒精誘導肝損傷具有一定的保護作用。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S917.4
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 貝類生物活性研究進展
    1.2 多糖生物活性研究現狀
        1.2.1 抗氧化活性
        1.2.2 抗腫瘤活性
        1.2.3 保護酒精性肝損傷
    1.3 貝類多糖的研究現狀
        1.3.1 海水貝類多糖生物活性研究現狀
        1.3.2 淡水貝類多糖生物活性研究現狀
    1.4 多糖的提取制備
    1.5 全肉酶解產物生物活性研究
        1.5.1 貝類酶解產物活性研究
        1.5.2 酶解產物解酒研究
        1.5.3 酶解工藝研究
    1.6 本論文研究的目的及意義
第二章 池蝶蚌酶解產物的制備及生物活性探究
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 池蝶蚌基本營養成分檢測
        2.2.2 池蝶蚌酶解產物的制備
        2.2.3 池蝶蚌酶解產物基本營養成分檢測
        2.2.4 池蝶蚌酶解產物氨基酸成分分析
        2.2.5 池蝶蚌酶解產物體外抗氧化實驗
        2.2.6 池蝶蚌酶解產物體外ADH激活率實驗
        2.2.7 醉酒實驗
        2.2.8 小鼠急性酒精肝損傷實驗
        2.2.9 數據統計分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 池蝶蚌及其酶解產物基本營養成分檢測
        2.3.2 池蝶蚌三種酶解產物氨基酸成分分析
        2.3.3 池蝶蚌三種酶解產物體外抗氧化活性
        2.3.4 體外檢測ADH激活率
        2.3.5 醉酒實驗
        2.3.6 急性肝損傷實驗
    2.4 討論
        2.4.1 酶解產物的制備及分析
        2.4.2 酶解產物的抗氧化分析
        2.4.3 酶解產物的解酒護肝分析
第三章 池蝶蚌多糖的提取及生物活性研究
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 多糖的制備
        3.2.2 HSP-1抗腫瘤活性探究
        3.2.3 HSP-1對酒精誘導的肝損傷影響探究
    3.3 實驗結果
        3.3.1 多糖的提取及分離純化
        3.3.2 HSP-1抑制腫瘤細胞實驗
        3.3.3 HSP-1對酒精誘導急性肝損傷實驗影響探究
    3.4 討論
        3.4.1 池蝶蚌多糖HSP-1的提取
        3.4.2 池蝶蚌多糖HSP-1抗腫瘤分析
        3.4.3 池蝶蚌多糖HSP-1修復酒精誘導肝損傷分析
第四章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
致謝
參考文獻

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本文編號：2887050