魚苗發育早期由于免疫組分的缺失在不同魚種中導致了致命的損失,研究表明通過母源免疫能向子代傳遞免疫組分并為子代提供一定的保護作用。然而,減毒活疫苗在母源免疫方面的研究十分有限。近期研究發現,通過鰻弧菌(Vibrio anguillarum)活苗刺激大菱鲆(Scophthalmus maximus)親魚后,子代免疫因子的母源傳遞得到了提高。斑馬魚作為一種研究透徹的模式動物,基于其在基因組上的豐富研究及遺傳學上的可操作性,成為研究硬骨魚母源免疫的理想模型。此外,由于斑馬魚發育早期各個時期易于區分,在研究魚類免疫系統早期發育特癥方面也具有很高的價值。本研究使用鰻弧菌減毒活疫苗MVAV6203免疫斑馬魚雌魚,在免疫后14天進行交配,選取免疫組及對照組親魚所產子代,對其不同發育時期殺菌活力進行了檢測及比較。將子代勻漿與鰻弧菌野生株MVM425共孵育后發現,實驗組子代勻漿相比對照組而言,其對鰻弧菌野生株的殺菌活力有了顯著提高。另外在斑馬魚子代發育到第六天時,對幼魚進行鰻弧菌野生株浸泡感染,通過提取總基因組DNA檢測鰻弧菌在幼魚體內的增殖情況,實驗結果表明,實驗組幼魚體內鰻弧菌增殖情況相比對照組存在明顯抑制現象。進一步通過RT-qPCR分析轉錄水平免疫相關因子的表達情況,發現減毒活疫苗免疫親魚使子代免疫因子轉錄水平的表達有很大提高。免疫組所產子代在發育早期固有免疫細胞的標記基因如spi.1, l-plastin, mpx和gata-1表現出明顯的表達提前以及表達上調。隨后通過二維電泳和間接酶聯免疫吸附(ELISA)實驗發現,通過減毒活疫苗免疫親魚,實驗組子代胚胎蛋白表達譜與對照組存在較顯著差異,同時總抗體水平明顯高于對照組,且受精24小時后,在實驗組胚胎中可以檢測到抗鰻弧菌、哈維氏弧菌和溶藻弧菌的特異性抗體。而且,通過對上述實驗結果的對比分析發現,胚胎及幼魚相對較高的抗體含量與其相對較高的殺菌活力及抑制菌體繁殖的能力在時相上存在一定的依存關系,暗示了母源傳遞抗體對子代抗特異性病原菌的保護作用。上述鰻弧菌減毒活疫苗在模式動物斑馬魚上的母源傳遞研究,為其在水產養殖中免疫防治應用提供了新的思路,也為提高幼魚品質,突破魚類養殖業中的幼苗存活率這一主要瓶頸提供了重要理論依據。
【學位單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S948
【部分圖文】：

告最新統計數據顯示，在全球范圍內水產養殖業產量在過去５０年來持續穩步增長Ｗ如圖??１．１所示。水產養殖作為食用魚類的一個重要來源，其產量已經可１＾＾與捕拔業產量相提??并論。近年來，我國作為世界上最大的水產養殖國家，在食用魚產量，尤其是水產養殖??產量方面顯著增加。水產養殖己經成為我國農業生產體系中最為重要的組分，水產養殖??業的發展不僅與農業經濟發展息息相關，同時也影響著我們的日常生活，不僅能保障國??家食物安全，更能積極應對氣候變化等全球問題Ｗ。??

華東理工大學碩±學位論文?第３頁??水的各種養殖和野生魚類レッ及貝類中，如大西洋蛙、虹轉、大菱鐘、妒魚、真觸、磐魚、??蠟魚、香魚和一些雙殼類軟體動物等，造成致命性出血敗血癥，即弧菌病。??從臨床表征上來看，弧菌病也被稱為鹽水巧、煮沸病或潰瘍病。弧菌病的典型癥狀??包括體重減輕、嗜睡、腹部腫脹、皮膚創傷Ｗ及潰窩和出血（圖１．３）。在被感染的魚體血??液及造血組織中可Ｗ發現高濃度輕弧菌。曖弧菌可通過皮膚感染ｙｘ及口腔攝取等途徑感??染魚類ＵＵ。誘導弧菌病的主要因素包括化學應力如水質、污染和飲食成分，生物應為如??養殖密度、其他微生物的相互影響及物理應為如濕度等。由于媛弧菌的高致病性和發??病率，己有大量學者針對其毒力致病機理進行了研究，雖然發病的機理尚未完全明確，??一些毒力相關因子和基因已得到了鑒定，包括影響細胞趨化的基因、鐵攝取系統、脂多??糖Ｗ及具有蛋白水解活性和溶血活性的胞外產物等。??

轉錄可在之后的１０天ｔｉｓｉ內抑制相關基因的功能，ＭＯ的作巧時長使得其可レッ用于抑制??相關基因調控免疫系統的發育。ＭＯｓ也能通過共注射來抑制不同的基因，從而實現在??活體內檢驗多個基因的功能。圖１．４顯示了通過注射Ｇ４劇的ＭＯ后導致的球蛋白產??生減少。該基因技術的在斑馬魚上的應用，為斑馬魚基因功能的研究奠定了基礎。??＾７＾?＾＾ＡＡＡＡＡＡＡ??／?ＧＡＴＡ－１?ＭＯ??…－??ｄ２?一?ＷＴ??ｒ?／?ｊｈ????—??Ｉｄ２?ＭＯ??ｇｌｏｂｉｎ??圖１．４斑馬魚胚胎中ＭＯ的使用??Ｆｉｇ．?１．４?Ｔｈｅ?ｕｓｅ?ｏｆ?ＭＯｓ?ｉｎ?ｚｅｂｒａ巧ｓｈ?ｅｍｂｒｙｏｓ．??通過建立表達巧光蛋白的轉基因斑馬魚也可１＾用來確定血細胞系。其中一些轉基因??
【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 郭秀平;鄧國成;楊小靜;;我國現行水產養殖動物使用國標獸藥的種類[J];海洋與漁業;2014年03期

2 唐啟升;丁曉明;劉世祿;王清印;聶品;何建國;麥康森;徐皓;林洪;金顯仕;張國范;楊寧生;;我國水產養殖業綠色、可持續發展保障措施與政策建議[J];中國漁業經濟;2014年02期

本文編號：2887083