研究背景骨質疏松癥是一種以骨量降低,骨組織微結構退化為主要表現的慢性退行性疾病。骨質疏松癥的發生率隨著年齡的增長而顯著增加。老年性骨質疏松主要的特征之一是成骨細胞數量減少,活性降低所導致的骨形成減少。細胞凋亡是調節成骨細胞穩態的主要機制。隨著年齡增長,成骨細胞凋亡顯著增加,最終可以導致骨量丟失。氧化應激在機體衰老過程中普遍存在,晚期氧化蛋白產物(AOPPs,advanced oxidation protein products)是一類含有二酪氨酸的新型氧化應激標志物。AOPPs可以誘導產生大量活性氧(ROS,reactive oxygen species),并導致多種細胞凋亡。因此,AOPPs不僅是氧化應激的產物,其本身也是一種新型的致病物質。前期研究表明,AOPPs水平隨著年齡增長顯著增加,并與老年性骨量丟失發生發展呈正相關;AOPPs刺激老年大鼠可以顯著加速其骨量丟失,骨質退化。因此我們提出假設:AOPPs通過誘導成骨細胞凋亡參與了年齡相關骨量丟失以及老年性骨質疏松的發生發展。材料與方法本研究的體外實驗部分選取小鼠前成骨細胞系MC3T3-E1細胞為模型,使用AOPPs刺激,觀察AO...

【文章頁數】：119 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１．入０？？８剌激誘導１＼１０１３－￡１細胞調亡

１．３．１?ＡＯＰＰｓ誘導ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞凋亡??為了驗證ＡＯＰＰｓ是否可以誘導成骨細胞凋亡，我們選擇體外培養的前成骨??細胞系ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞作為模型。如圖１－１Ａ所示，ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ雙染配合??流式細胞技術結果顯示：２４ｈ時，單純完全培養基組，２０（....

圖１－２．?ＡＯＰＰｓ刺激激活ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞內源性凋亡途徑

?作為對照。使用ＪＣ－１線粒體膜電位探針，通過檢測綠色和紅色熒光強度的比值??來反應線粒體膜電位的變化情況。如圖１－２Ａ激光共聚焦圖片所示，ＡＯＰＰｓ刺激??后，綠色熒光／紅色熒光比值顯著升高，提示線粒體膜電位的下降，并呈現濃度??依賴性。用２０〇ｎｇ／ｍｌ?ＡＯＰＰｓ刺激ＭＣ３....

圖２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激誘導ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞產生大量Ｒ〇Ｓ

（２?）使用含打ＡＯＰＰｓ濃度力２００叫／ｍ丨的完傘培養苺分別刺激ＭＣ３＇ｌ＇３－ｍ細胞??Ｏｍｉｎ，?５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，?６０ｍｉｎ，１２０ｍｉｎ，使用??導ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞產生ＲＯＳ隨刺激時間變化的情況。結果如圖２－１Ｂ所不，??ＡＯＰＰｓ刺激可以顯著誘導ＭＣ３Ｔ３－....

圖２－??２Ｃ），最終完成ＮＡＤＰＨ氧化酶的激活

?〇ｉ?〇??ＡＯＰＰｓ?（ｐｇ／ｍｌ）??ＡＯＰＰｓ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激誘導ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞產生大量Ｒ〇Ｓ。（Ａ）使用不同濃度ＡＯＰＰｓ?（０．??４０〇ｎｇ／ｍｌ）刺激ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞Ｉ２０ｍｉｎ，?ＤＣＦＨ－Ｄ....

本文編號：4002529