骨骼肌占成年動物體重的40%～50%,是人體關鍵的發動器官,是肌肉骨骼系統不可缺少的組成部分。骨骼肌具有較強的再生能力,肌肉干細胞在骨骼肌再生過程中起關鍵作用。肌肉干細胞又名肌肉衛星細胞(satellite cells,SCs)在成年個體肌肉中位于肌纖維細胞膜和基膜之間,處于靜息態[1]。肌肉受損傷時SCs被激活進入細胞周期,快速分裂產生大量成肌祖細胞(myogenic progenitor cells,MPCs),MPCs分化形成新的肌管完成受損肌肉的修復[2]。應對輕微損傷(如肌肉拉傷,利器割傷等)肌肉干細胞在微環境(壞死肌纖維,胞外基質、間質細胞及生長因子等成分構成)調控下可以完成修復,然而在肌肉嚴重缺損(如手術切除)即肌肉大體積缺失(volumetric muscle loss,VML)時卻不能完成修復,以致形成大量的疤痕組織[3-8]。目前臨床對VML的傳統治療手段為自體移植和異體移植,這種方法不僅受免疫排斥和有限供體的限制且移植后受損肌肉幾乎不能恢復到損傷前水平[9-11]。因此尋找新VML治療手段及解析骨骼肌再生修復機制迫在眉睫。組織工程是一種單獨或組合運用種子細胞、支架材...

【文章頁數】：101 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
緒論
1 第一章 MPCs與骨骼肌ECM相互作用初步探究
    1.1 引言
    1.2 實驗試劑與儀器
        1.2.1 材料和試劑
        1.2.2 實驗儀器及材料
        1.2.3 實驗動物
        1.2.4 試劑配制
    1.3 實驗方法
        1.3.1 成肌祖細胞的分離
        1.3.2 脫細胞基質制備
        1.3.3 H&E染色
        1.3.4 免疫熒光
        1.3.5 考馬斯亮藍染色(每步操作都在搖床上進行)
        1.3.6 細胞凍存(除MPCs細胞外)
        1.3.7 成肌祖細胞(MPCs)細胞凍存
        1.3.8 細胞復蘇
        1.3.9 熒光實時定量PCR (Real time PCR)
        1.3.10 蛋白印跡
        1.3.11 掃描電鏡樣品制備方法:
        1.3.12 統計學分析
    1.4 實驗結果
        1.4.1 成肌祖細胞(myogenic progenitor cells,MPCs)分離
        1.4.2 MPCs純化
        1.4.3 MPCs鑒定及純度統計
        1.4.4 MPCs分化成肌能力檢測
        1.4.5 骨骼肌脫細胞支架的制備
        1.4.6 骨骼肌脫細胞支架表征
        1.4.7 骨骼肌脫細胞支架生物相容性
        1.4.8 MPCs能夠在骨骼肌脫細胞基質上成肌分化
        1.4.9 構建組織工程肌肉束
    1.5 討論
2 第二章小鼠骨骼肌快速貼壁細胞在成肌過程中的作用
    2.1 引言
    2.2 實驗試劑和儀器
        2.2.1 材料和試劑
        2.2.2 實驗儀器及材料
        2.2.3 實驗動物
        2.2.4 試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 成肌祖細胞的分離(同第一章)
        2.3.2 免疫熒光(同第一章)
        2.3.3 成肌祖細胞(MPCs)細胞凍存(同第一章)
        2.3.4 細胞復蘇(同第一章)
        2.3.5 RNA提取(同第一章)
        2.3.6 RACs與MPCs 3D共培養
        2.3.7 Moveheat檢測骨骼肌類器官生理功能的原理
        2.3.8 透射電鏡樣本制備
        2.3.9 統計學分析(同第一章)
    2.4 實驗結果
        2.4.1 構建骨骼肌類器官
        2.4.2 RACs能夠促進MPCs成肌
    2.5 討論
3 第三章 基于單細胞轉錄組測序技術解析小鼠骨骼成肌過程中的細胞亞群及細胞間的聯系
    3.1 引言
    3.2 實驗試劑與儀器
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 實驗儀器及材料
        3.2.3 實驗動物
        3.2.4 試劑配制
    3.3 實驗方法
        3.3.0 從6-8w雄性C57小鼠肌肉中的離RACs和SACs(同第一章)
        3.3.1 單細胞轉錄組文庫構建
        3.3.2 細胞爬片免疫熒光
        3.3.3 細胞凍存(除MPCs細胞外)
        3.3.4 成肌祖細胞(MPCs)細胞凍存(同第二章)
        3.3.5 細胞復蘇(同第一章)
        3.3.6 RNA提取(同第一章)
        3.3.7 將RNA逆轉錄成cDNA(同第一章)
        3.3.8 透射電鏡樣本制備(同第二章)
        3.3.9 統計學分析(同第一章)。
    3.4 實驗結果
        3.4.1 單細胞轉錄組測序解析RACs細胞亞型。
        3.4.2 RACs異質性分析
        3.4.3 RACs與MPCs相互作用潛在關系計算
        3.4.4 RACs與MPCs配體-受體相互作用的GO (Gene Ontology)分析
        3.4.5 RACs對MPCs成肌的促進作用
    3.5 討論
4 總結
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：4054675