牡丹(Paeonia Sect.Moutan)遺傳背景復雜,通過雜交育種培育一個新品種至少需要10余年時間,包括轉基因育種在內的分子育種將成為牡丹遺傳改良的主要發展方向。然而,牡丹組織離體再生困難,至今尚未建立成熟的遺傳轉化技術體系。因此,探索一種簡單、快速、有效的遺傳轉化新方法對牡丹育種具有重要意義。本研究采用四氧化三鐵納米磁珠轉化方法,首次進行了花粉介導牡丹轉基因的研究,選用磁性納米顆粒(Magnetic nanoparticles,MNPs)poly MAG100為基因載體,構建不同質量比的納米載體-基因復合物;通過瓊脂糖凝膠電泳阻滯試驗分析poly MAG100與DNA的結合能力以及保護DNA免受消化酶降解的能力;利用MNPs吸附質粒DNA,在磁場的作用下,將FT-EPSPS目的基因導入花粉,通過離體培養研究磁轉染處理對花粉活力的影響;研究牡丹三個雜交組合FI代植株對草甘膦鹽溶液的敏感性,及對潮霉素溶液的抗性,探究得出適宜牡丹的篩選體系;對初步篩選出的抗性種苗進行外源基因分子檢測,分析其在牡丹基因組中的整合情況。所得結論如下:1 poly MAG100與DNA的質量比為1:1-1...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1草甘膦的作用機理

5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)在磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和莽草酸-3-磷酸(S3P)反應合成5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸(EPSP)的過程中起到催化劑的作用,而草甘膦的空間結構與磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)較為相似,并且兩者與5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3....

圖1-2研究技術路線

綜上所述,本研究的技術路線可以總結為圖1-2。2.1試驗材料

圖2-1 PCAMBIA 1301圖譜

引物由TaKaRa公司合成。2.2試驗方法

圖2-2 pCAMBIA1301-FT菌液PCR

挑選出陽性單菌落擴搖后,進行菌液PCR擴增反應,擴增長度約為970bp,經瓊脂糖凝膠電泳分析,結果表明:條帶與預期大小相符(圖2-2),初步表明該克隆即為陽性克隆。2.3.2pCAMBIA1301-FT產物的鑒定

本文編號：4055182