類鈣調磷酸酶B亞基蛋白（calcineurin B-like proteins,CBLs）是植物中一類特殊的鈣離子感受器,在應對多種生物與非生物脅迫反應中起到十分重要的作用.目前有關CBLs基因生物學功能研究主要集中于擬南芥與水稻,番茄中相關功能報道較少.研究利用同源克隆方法,從番茄中分離出1個SlCBL1基因;應用半定量PCR技術研究SlCBL1基因在不同組織的相對表達水平,將該基因構建超表達載體并遺傳轉化本氏煙.結果表明:SlCBL1基因cDNA全長639 bp,編碼212個氨基酸殘基;基因組全長5 000 bp,包含8個外顯子及7個內含子;推導的氨基酸序列與煙草NtCBL1蛋白相似度最高,且包含CBL蛋白結合Ca²⁺所必需的4個EF手型結構.SlCBL1在番茄不同組織中均有表達,但在營養器官中的表達最高,并且響應多種非生物脅迫.與對照相比,過超量表達SlCBL1基因的本氏煙株系提高了對鹽脅迫的抗性.上述研究表明,番茄SlCBL1基因能夠響應并拮抗非生物脅迫,這為進一步研究CBL1生物學功能提供了基礎.

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圖1 番茄SlCBL1推導氨基酸序列特征及系統進化樹

采用半定量RT-PCR分析SlCBL1基因在番茄不同組織中的表達情況,發現該基因在各種器官中均有表達,在根、莖、葉等營養器官中表達豐度較高(見圖3).分別對四葉一心期的番茄苗分別進行ABA、pH、鹽、干旱、低溫等脅迫處理,發現SlCBL1基因均能被上述逆境在不同程度上誘導表達(見....

圖2 SlCBL1基因的結構特征

圖1番茄SlCBL1推導氨基酸序列特征及系統進化樹圖3SlCBL1基因在脅迫處理及不同組織中的表達情況

圖3 SlCBL1基因在脅迫處理及不同組織中的表達情況

圖2SlCBL1基因的結構特征圖4SlCBL1的過表達載體的PCR及酶切驗證

圖4 SlCBL1的過表達載體的PCR及酶切驗證

圖3SlCBL1基因在脅迫處理及不同組織中的表達情況2.4超表達SlCBL1轉基因本氏煙植株的獲得

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