目的:研究缺氧復(fù)氧對心肌細(xì)胞自噬和線粒體Cx43的影響,探討自噬與線粒體Cx43在心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中的關(guān)系及作用。方法:分別對乳鼠原代心肌細(xì)胞和H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),根據(jù)培養(yǎng)情況最終選擇H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。通過對H9c2心肌細(xì)胞更換為不含血清的低糖DMEM培養(yǎng)基并置于缺氧（5%C02、2%02）培養(yǎng)箱中12h作為缺氧處理,后恢復(fù)含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基及常氧培養(yǎng)12h作為復(fù)氧處理。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、CCK-8檢測細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒測培養(yǎng)液中LDH活性,建立心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧（H/R）模型。按隨機(jī)原則將心肌細(xì)胞分為五組:對照組、H/R組、格爾德霉素組（GA組）、3-甲基腺嘌呤組（3-MA組）、格爾德霉素+3-甲基腺嘌呤組（GA+3-MA組）。GA處理是在缺氧復(fù)氧前先對心肌細(xì)胞進(jìn)行30min的GA（1μmol/L）預(yù)處理;3-MA處理是在缺氧復(fù)氧同時在培養(yǎng)基中加入3-MA（5mmol/L）進(jìn)行干預(yù)。CCK-8檢測細(xì)胞存活率,JC-1法檢測線粒體膜電位,Western blot測定Beclin-1、LC3B、線粒體Cx43及線粒體磷酸化Cx4... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞??Ｆｉｇ．?１－２?Ｈ９ｃ２?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??

Ｂ?Ｃ??圖１－１原代心肌細(xì)胞Ａ：單個、分散的心肌細(xì)胞，Ｂ：心肌細(xì)胞簇，Ｃ：心肌細(xì)胞網(wǎng)??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ?Ａ：?ｓｉｎｇｌｅ，?ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，?Ｂ：?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ??ｃｌｕｓｔｅｒ，?Ｃ：?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ?ｎｅｔｗｏｒｋ??１．４．２?Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞培養(yǎng)情況??于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，生長情??況良好。??圖１－２?Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞??Ｆｉｇ．?１－２?Ｈ９ｃ２?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??１．?４．?３心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型建立情況??１３??

?Ｓ?２－??ｕｌｎ?１ＪＪ，?１１?Ｊ＿ｎ?＾?Ｊｎ?１，１１，１?ｎ?ｎ??圖２－２?各組細(xì)胞Ｂｅｃｌｉｎ－１和ＬＣ３Ｂ的蛋白表達(dá)水平Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測結(jié)果，Ｂ：??各組Ｂｅｃｌｉｎ－１蛋白水平的比較，Ｃ：各組ＬＣ３ＢＩＩ／ＬＣ３ＢＩ比值的比較（ｆ±ｓ，?ＳＰ＜０．?０５ｖｓ??對照組，＇？＜〇．?０５?ｖｓ?Ｈ／Ｒ?組）??Ｆｉｇ．２－２?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ａｎｄ?ＬＣ３Ｂ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?Ａ：?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ，?Ｂ：??ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ，?Ｃ：?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ＬＣ３ＢＩＩ／ＬＣ３ＢＩ?ｒａｔｉｏｓ?ｉｎ??ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ（ｘ±ｓ，?＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?＊Ｐ＜０．０５ｖｓ?Ｈ／Ｒ?ｇｒｏｕｐ）??２．?４．?２各組線粒體Ｃｘ４３及ｐ－Ｃｘ４３蛋白水平的比較??由圖２－３可見，Ｈ／Ｒ組的線粒體Ｃｘ４３?


本文編號：2911551